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文檔簡介
1、目的: 構(gòu)建并擴(kuò)增攜帶紅色熒光蛋白的抗菌肽PR-39的重組腺病毒載體(AdPR-39)及攜帶綠色熒光蛋白的骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9(BMP-9)的重組腺病毒載體(AdBMP-9)，AdPR-39與AdBMP-9共轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2，檢測PR-39及BMP-9在C3H10T1/2細(xì)胞中的表達(dá)及生物活性。
方法: PCR擴(kuò)增PR-39片段，亞克隆至pAdTrack-TO4質(zhì)粒，構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒pAdTrack-TO4-
2、PR-39，經(jīng)雙酶切及測序鑒定。pAdTrack-TO4-PR-39經(jīng)PmeⅠ酶切，轉(zhuǎn)化感受態(tài)AdEasier細(xì)胞，構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒pAdPR-39。pAdPR-39經(jīng)PacⅠ酶切后轉(zhuǎn)染至HEK293獲得重組腺病毒AdPR-39并進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增重組腺病毒AdBMP-9。將重組腺病毒AdPR-39及AdBMP-9感染間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2，通過熒光顯微鏡觀察、RT-PCR及western blot鑒定目的蛋白的表達(dá)，同時(shí)檢測PR
3、-39的抗菌活性。
結(jié)果: pAdTrack-TO4-PR-39及pAdPR-39構(gòu)建成功;AdPR-39包裝成功，AdPR-39及AdBMP-9成功擴(kuò)增。 AdPR-39及AdBMP-9成功感染C3H10T1/2細(xì)胞，且表達(dá)了PR-39及BMP-9蛋白。轉(zhuǎn)染含PR-39的細(xì)胞的上清液能有效抑制金黃色葡萄球菌的生長，計(jì)算其抑菌率為96.1％。
結(jié)論: 成功構(gòu)建攜帶紅色熒光蛋白的PR-39重組腺病毒載體。通過重組腺病
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