紅豆杉單組份多糖的分離純化，結(jié)構(gòu)分析及抗腫瘤藥效研究.pdf

1、紅豆杉屬于我國(guó)一級(jí)保護(hù)的珍貴樹種，自從在紅豆杉中提取出具有很強(qiáng)抗腫瘤活性的紫杉醇后，紅豆杉便成為人們研究的熱點(diǎn)。由于紅豆杉在被提取紫杉醇后，大部分都被丟棄，造成很大資源浪費(fèi)，因此人們逐漸將目光投向紅豆杉中其他一些具有生物活性成分的研究，如萜類，生物堿、黃酮、多糖等。本次工作就是以紅豆杉為研究對(duì)象，對(duì)其多糖組份的分離純化、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和生物活性進(jìn)行研究。
　　1、采用堿提醇沉的方法提取多糖，分別通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)得到多糖的最佳堿提

2、工藝條件:固液比為1∶20(g/mL)，浸提時(shí)間為120 min，堿液濃度為1.0 mol/L，浸提溫度為75℃。在此最優(yōu)組合條件下，多糖的提取得率為3.45％。
　　2、分離純化工藝中，粗多糖通過(guò)DEAE Sepharose Fast Flow離子交換色譜分離得到CPTC-1、CPTC-2與CPTC-3三個(gè)組份;CPTC-1、CPTC-2進(jìn)一步通過(guò)Sephadex G-100層析柱分離以及Sephadex G-10層析柱的純化，

3、分別得到CPTC-1a、CPTC-1b和CPTC-2三個(gè)純組份。
　　3、結(jié)構(gòu)分析過(guò)程中，凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定CPTC-1a、CPTC-1b和CPTC-2的分子量分別為135276 Da、8862 Da、73527 Da，結(jié)合紫外全波段掃描分析三個(gè)單組份多糖均為均一組份;采用氣相色譜法測(cè)定了三個(gè)多糖的單糖組成:CPTC-1a、CPTC-1b和CPTC-2均是由葡萄糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖和半乳糖組成，摩爾比分別為C

4、PTC-1a:1.00∶0.63∶0.17∶4.32∶0.33∶2.08; CPTC-1b:1.00∶0.53∶0.21∶3.70∶0.55∶2.20; CPTC-2∶1.00∶0.32∶0.27∶3.34∶1.22∶1.84;經(jīng)IR、NMR、高碘酸氧化和smith降解、甲基化、原子力顯微鏡等方法，推測(cè)出三個(gè)多糖的結(jié)構(gòu)信息:組成三個(gè)紅豆杉單組份多糖的單糖含有吡喃環(huán)的α-構(gòu)型和β-構(gòu)型，三個(gè)紅豆杉單組份多糖主要是以α-(1→3)-阿拉伯糖

5、和α-（1→4）-半乳糖為骨架，分支主要是由α-(1→3，5)-阿拉伯糖和β-(1→3，6)-甘露糖組成，非還原性末端主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖和木糖組成。CPTC-1a和CPTC-2多糖由若干直徑多糖顆粒聚集纏繞而成，CPTC-1b的分子鏈呈現(xiàn)出多個(gè)鏈狀和棒狀結(jié)構(gòu)。
　　4、通過(guò)MTS法和流式細(xì)胞術(shù)研究了紅豆杉多糖對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901的抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三個(gè)紅豆杉單組份多糖均能通過(guò)誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡發(fā)揮抗腫