紅豆杉多糖PSY-1的抗腫瘤活性及機(jī)制研究.pdf

1、目的：轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最顯著的特征之一，是大多數(shù)腫瘤病人的主要致死原因，臨床上90％以上惡性腫瘤病人死于轉(zhuǎn)移相關(guān)的并發(fā)癥，因此抑制轉(zhuǎn)移被認(rèn)為是改善腫瘤治療現(xiàn)狀最有希望的突破口，因此無論在生物學(xué)領(lǐng)域還是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究及藥物發(fā)現(xiàn)是經(jīng)久不衰的熱點(diǎn)。我們?cè)谇捌趯?shí)驗(yàn)中從南方紅豆杉的枝葉中分離、提純和鑒定了一種分子量(Mw)為106 kD的水溶性單組分紅豆杉多糖PSY-1，PSY-1在總多糖中含量最高，本研究主要圍繞PSY-1開展抗腫瘤

2、活性及相關(guān)機(jī)制研究，旨在明確PSY-1的抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用及可能機(jī)制，為PSY-1相關(guān)藥物設(shè)計(jì)及其臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)也將推動(dòng)紅豆杉屬植物紅豆杉的開發(fā)利用。
　　方法：⑴采用磺酰羅丹明B染色法（SRB法），以紫杉醇為陽性對(duì)照檢測(cè)PSY-1對(duì)人卵巢癌細(xì)胞A2780和SKOV-3、人肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721、人前列腺癌細(xì)胞PC-3、人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29和鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-F10的增殖抑制作用。⑵采用細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)

3、驗(yàn)及細(xì)胞Transwell實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)PSY-1對(duì)腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)遷移能力的影響。⑶采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR在轉(zhuǎn)錄水平考察PSY-1對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的影響。采用蛋白質(zhì)印跡法考察PSY-1對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶及其相關(guān)信號(hào)通路的蛋白表達(dá)水平的影響。采用明膠酶譜法考察PSY-1對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶酶活性的影響。⑷建立荷瘤小鼠模型，考察PSY-1對(duì)S180肉瘤、HepA肝癌及Lewis肺癌的體內(nèi)抑制作用。
　　結(jié)果：①紅豆杉多糖PSY-1對(duì)多種腫瘤細(xì)胞

4、均具有一定的增殖抑制作用，IC50在1.55 mg/mL和15.03 mg/mL之間，且在HepG2中活性最強(qiáng)，而在SMMC-7721中活性相對(duì)較弱，其對(duì)鼠黑色素瘤細(xì)胞B16-F10的IC50為11.97 mg/mL。②劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)顯示在PSY-1(0.2 mg/mL，1 mg/mL和5 mg/mL)能有效抑制B16-F10細(xì)胞的劃痕修復(fù)，且呈濃度依賴性。Transwell實(shí)驗(yàn)表明PSY-1(1mg/mL和5 mg/mL)能有效抑制B1

5、6-F10細(xì)胞從上室向下室的遷移，抑制率分別為35％和50％。③RT-PCR實(shí)驗(yàn)表明PSY-1(1 mg/mL和5 mg/mL)能有效降低MMP-2的mRNA表達(dá)水平，且具有濃度依賴性。明膠酶譜實(shí)驗(yàn)表明PSY-1（1 mg/mL和5mg/mL）能有效抑制MMP-2和MMP-9的酶活性。蛋白免疫實(shí)驗(yàn)表明PSY-1能顯著下調(diào)MMP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)水平，PSY-1(1 mg/mL和5 mg/mL)對(duì)AKT、p38、ERK的磷酸化水平

6、無顯著影響，但能減少IκB的磷酸化。④體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明PSY-1能有效抑制S180肉瘤、Lewis肺癌、HepA肝癌荷瘤小鼠模型中的腫瘤生長。
　　結(jié)論：本研究表明在體外PSY-1對(duì)多株人源及鼠源腫瘤細(xì)胞的增殖具有顯著的抑制作用，在無毒劑量(0-5 mg/mL)能顯著抑制B16-F10細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。在體內(nèi)PSY-1能抑制S180肉瘤、Lewis肺癌、HepA肝癌荷瘤小鼠模型的腫瘤生長。其抗轉(zhuǎn)移作用可能跟抑制基質(zhì)金屬蛋白酶家族成