單?；视椭久敢种苿㎎ZL184對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖凋亡遷移的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、背景：脂肪代謝及脂質(zhì)分子與腫瘤關(guān)系密切。單酰胺基脂肪酶(MAGL)主要參與人體內(nèi)甘油三脂代謝生成游離脂肪酸（FFAs）。最新研究表明，單?；视椭久竿ㄟ^調(diào)節(jié)脂肪酸網(wǎng)絡(luò)提高腫瘤細(xì)胞致病性及侵襲性。并且抑制 MAGL基因或活性后，一些與腫瘤密切相關(guān)的脂質(zhì)分子如溶血磷脂（LPA），前列腺素 E2(PGE2)等水平隨 FFAs水平發(fā)生變化。MAGL-FFAs通路調(diào)節(jié)脂肪酸網(wǎng)絡(luò)從而影響腫瘤侵襲性，MAGL是其中關(guān)鍵的節(jié)點(diǎn)。在結(jié)腸癌中MAGL高表

2、達(dá)與腫瘤組織中，并且抑制MAGL基因表達(dá)及活性會導(dǎo)致結(jié)直腸癌細(xì)胞株增殖減弱，凋亡增多，細(xì)胞周期阻滯，侵襲能力下降，其可能與Cyclin D1及Bcl-2有關(guān)，但是MAGL與細(xì)胞凋亡及腫瘤遷移之間的關(guān)系仍不明確。本實(shí)驗(yàn)旨在探索JZL184抑制MAGL活性對結(jié)直腸癌細(xì)胞系增殖、凋亡和遷移影響，尋求結(jié)直腸癌治療新的靶點(diǎn)及治療方法。
　　目的：研究MAGL抑制劑JZL184對結(jié)直腸癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)移能力及對化療藥物敏感性的影

3、響及其機(jī)制。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)首先利用JZL184干預(yù)結(jié)直腸癌細(xì)胞系，通過MTT檢測JZL184對結(jié)直腸癌細(xì)胞系增殖能力的影響，及JZL184聯(lián)合5-FU與單用5-FU對腫瘤影響有無差異，流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測JZL184對結(jié)直腸癌細(xì)胞凋亡的影響以及比較L184聯(lián)合不同濃度的5-FU與單用5-FU對結(jié)直腸癌細(xì)胞系凋亡影響的差異。然后Transwell檢測JZL184對不同轉(zhuǎn)移潛能的SW480及SW620細(xì)胞系細(xì)胞遷移的影響。之后利用

4、Realtime-PCR和Western-blot檢測Bcl-2及Bax基因及蛋白水平的變化。最后利用Western-blot檢測其他細(xì)胞凋亡分子pro-Caspase8和pro-Caspase3、與上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān)的分子以及AKT-mTOR通路中p-AKT及p-mTOR蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：JZL184可抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞系 SW480、Lovo、HCT116細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞系細(xì)胞凋亡增多。JZL184聯(lián)合不同濃

5、度的5-FU與單用5-FU相比，可提高結(jié)直腸癌細(xì)胞系細(xì)胞凋亡并抑制細(xì)胞增殖。隨后我們利用JZL184干預(yù)具有不同轉(zhuǎn)移潛能的SW480及SW620,發(fā)現(xiàn)JZL184可抑制兩種細(xì)胞系細(xì)胞遷移并且其抑制SW620的效果要強(qiáng)于SW480。最后我們通過Western blot及Real-time PCR檢測，發(fā)現(xiàn)與凋亡相關(guān)BCL的-2 mRNA及蛋白水平下降，Bax的mRNA及蛋白水平上升,E-cardherin蛋白水平上升，Pro-Caspas

6、e8、pro-Caspase3、p-AKT、p-mTOR、Vimentin及Snail蛋白水平下降。
　　結(jié)論：JZL184可抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞系細(xì)胞增殖及遷移，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，增加腫瘤細(xì)胞對5-FU敏感性。其機(jī)制可能是 JZL184調(diào)控與凋亡有關(guān)的 BCL-2/Bax和pro-Caspase8/pro-Caspase3表達(dá)水平從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，影響EMT相關(guān)蛋白表達(dá)從而抑制腫瘤細(xì)胞遷移能力。并且JZL184可能通過AKT-mTO