AhR介導(dǎo)KGF對(duì)結(jié)直腸癌上皮細(xì)胞增殖作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　結(jié)直腸癌已成為全球關(guān)注的健康問(wèn)題，不僅僅嚴(yán)重的影響到我們中國(guó)人的身體健康，在國(guó)外結(jié)直腸癌也是一種高發(fā)病的疾病，每年都有一大批的患者死于該病。角質(zhì)細(xì)胞因子(KGF)作為一種典型的生長(zhǎng)因子，在我們實(shí)驗(yàn)室的前期實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)證明了其對(duì)腸道具有明顯的保護(hù)作用，已明確的是在腸道上皮細(xì)胞增殖方面具有重要的作用。近來(lái)研究顯示，KGF和KGFR顯著的高表達(dá)于人的結(jié)直腸癌組織中。進(jìn)一步研究表明，高表達(dá)的促有絲分裂生長(zhǎng)因子(FGF)能夠通過(guò)自

2、分泌或旁分泌的方式促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖。此外，在老鼠的成纖維細(xì)胞中，F(xiàn)GF能夠調(diào)控AhR的表達(dá)。由此，我們推測(cè)在結(jié)直腸癌組織中高表KGF和AhR，并且KGF的刺激能夠上調(diào)及活化AhR，在此基礎(chǔ)上我們對(duì)AhR介導(dǎo)KGF促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的機(jī)制進(jìn)行了探討。
　　方法：
　　1、從新橋醫(yī)院普通外科獲取12例結(jié)直腸癌病人的臨床樣本。并用熒光定量PCR檢測(cè)12例結(jié)直腸癌病人癌組織和對(duì)應(yīng)正常組織中KGF、AhR、CYP1A1的表達(dá)水平。采

3、用免疫組化技術(shù)定位AhR在正常組織和癌組織中的分布情況。
　　2、用KGF作用LoVo和T84兩種結(jié)直腸癌細(xì)胞株24 h后，MTT被用來(lái)檢測(cè)癌細(xì)胞的增殖，流式細(xì)胞學(xué)被用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化，免疫熒光、蛋白免疫印跡、熒光定量PCR檢測(cè)AhR、CYP1A1的表達(dá)變化。
　　3、化學(xué)干擾掉兩種結(jié)直腸癌細(xì)胞株中的AhR并饑餓處理24h后，KGF繼續(xù)作用癌細(xì)胞24h，MTT被用來(lái)檢測(cè)癌細(xì)胞的增殖，流式細(xì)胞學(xué)被用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化，免

4、疫熒光、蛋白免疫印跡、熒光定量PCR檢測(cè)Cyclin D1、pRb、CYP1A1的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1、12個(gè)臨床結(jié)直腸癌病人樣本中，有11個(gè)癌癥病人的樣本組織中KGF的mRNA水平是高表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn)中KGF能夠顯著的促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞株的增殖和S期細(xì)胞數(shù)。
　　2、12個(gè)臨床結(jié)直腸癌病人樣本中，有11個(gè)癌癥病人的樣本組織中AhR的mRNA水平是高表達(dá)，并且有8個(gè)癌癥病人的樣本中CYP1A1的mRNA水平高表達(dá)

5、。在所檢測(cè)的癌組織和正常組織樣本中AhR大量分布于上皮細(xì)胞中。
　　3、在體外培養(yǎng)的LoVo和T84細(xì)胞株中，KGF的刺激能夠顯著促進(jìn)AhR和CYP1 A1 mRNA和蛋白水平的表達(dá)，同時(shí)免疫熒光也進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn)。
　　4、在KGF促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖方面，KGF能夠顯著的促進(jìn)癌細(xì)胞株的增殖，通過(guò)干擾AhR后，這一促進(jìn)作用被明顯的抑制。
　　5、細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1控制著細(xì)胞進(jìn)程的關(guān)鍵點(diǎn)，我們實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)KG

6、F能夠促進(jìn)LoVo和T84兩種癌細(xì)胞株中Cyclin D1的表達(dá)，然而干擾掉AhR后，Cylin D1的表達(dá)明顯的被抑制。
　　6、CyclinD1控制著細(xì)胞周期從G1期進(jìn)入S期，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，KGF能夠顯著的促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)入S期，然而AhR干擾后，抑制了細(xì)胞周期從G1期進(jìn)入S期，進(jìn)而抑制了KGF對(duì)癌細(xì)胞的增殖。
　　結(jié)論:
　　KGF能夠促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖，并且AhR在其中伴有重要的作用。A