脂氧合酶抑制劑NDGA對肝癌細胞HepG2增殖與凋亡的調(diào)節(jié)作用及其可能機制.pdf

1、目的:探討脂氧合酶(1ipoxygenase)抑制劑對肝癌細胞株HepG2增殖與凋亡的調(diào)節(jié)作用及其對凋亡相關基因表達的影響。進一步揭示脂氧合酶抑制劑的抗腫瘤機制，為藥物實驗及臨床應用提供理論依據(jù)，以拓寬肝癌的發(fā)病機制及藥物治療學的研究視野。 方法:①選用人肝癌細胞株HepG2作為研究對象，加入脂氧合酶抑制劑去甲二氫愈創(chuàng)木酸(NDGA)(濃度設為25、50、100、200μmol/L)進行體外培養(yǎng)，采用對數(shù)生長期的細胞進行實驗。②

2、應用MTT比色法觀察NDGA對HepG2增殖的影響。④熒光染色法、透射電鏡觀察細胞凋亡形態(tài)。④流式細胞儀進行細胞周期及凋亡檢測。 ⑤RT-PCR檢測NDGA對端粒酶hTERTmRNA、bc1-2及bax凋亡相關基因表達水平的影響。 結果：①NDGA(25～200μmol/L)對肝癌細胞HepG2增殖有抑制作用，其體外增殖呈量效和時效關系，生長抑制率由5.23％增至61.20％。藥物濃度越高，抑制作用越強，呈明顯的劑量效應關系；系

3、列濃度NDGA作用于細胞24h、48h、72h，作用時間越長，抑制作用越強，呈時間依賴性。高濃度NDGA可誘導HepG2凋亡，各組之間差異有顯著性(P<0.01)。根據(jù)中效方程式計算出72h的工C50值為128.37μmol/L。以給藥濃度為自變量，抑制率為因變量對作用不同時間的各組進行回歸分析，顯示給藥濃度與抑制率呈明顯正相關，r24=0.965，P<0.01，48=0.902，P<0.01，r72=0.981，P<0.01。②熒光染

4、色法顯示NDGA作用HepG2細胞48h后染色，細胞體積縮小、形態(tài)變圓、胞膜皺縮呈毛刺狀、細胞內(nèi)含高度濃縮的染色質(zhì)胞核，部分呈核碎片狀，可見到核裂解成雙核。有較多的細胞脫落，懸浮于細胞液中。③透射電鏡可見細胞變圓縮小，細胞膜凹陷，偽足斷裂，微絨毛卷曲縮短、消失，典型的細胞核濃縮致密、凋亡小體形成的細胞形態(tài)學改變。④流式細胞儀顯示，隨藥物濃度增加，細胞凋亡率顯著增加，經(jīng)NDGA 200μmol/L作用48h后早期凋亡率達41.6±2.3。

5、NDGA能引起肝癌細胞阻滯于S期，G0/G1期細胞比例下降。⑤RT-PCR檢測顯示NDGA明顯下調(diào)端粒酶-5-LOX、hTERTmRNA和bc1-2及上調(diào)bax的表達，存在一定的劑量依賴關系，各處理組與對照組相比，有統(tǒng)計學意義。 結論：①脂氧合酶抑制劑NDGA對肝癌細胞HepG2的體外生長增殖具有抑制作用，呈劑量和時間依賴性效應，同時可以阻滯細胞周期于S期。其作用機理可能式通過抑制細胞增殖和誘導細胞凋亡的途徑來實現(xiàn)的。②NDG