脂氧合酶抑制劑NDGA對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖與凋亡的調(diào)節(jié)作用及其可能機(jī)制.pdf

1、目的:探討脂氧合酶(1ipoxygenase)抑制劑對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2增殖與凋亡的調(diào)節(jié)作用及其對(duì)凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響。進(jìn)一步揭示脂氧合酶抑制劑的抗腫瘤機(jī)制，為藥物實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，以拓寬肝癌的發(fā)病機(jī)制及藥物治療學(xué)的研究視野。 方法:①選用人肝癌細(xì)胞株HepG2作為研究對(duì)象，加入脂氧合酶抑制劑去甲二氫愈創(chuàng)木酸(NDGA)(濃度設(shè)為25、50、100、200μmol/L)進(jìn)行體外培養(yǎng)，采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。②

2、應(yīng)用MTT比色法觀察NDGA對(duì)HepG2增殖的影響。④熒光染色法、透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)。④流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期及凋亡檢測(cè)。 ⑤RT-PCR檢測(cè)NDGA對(duì)端粒酶hTERTmRNA、bc1-2及bax凋亡相關(guān)基因表達(dá)水平的影響。 結(jié)果：①NDGA(25～200μmol/L)對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖有抑制作用，其體外增殖呈量效和時(shí)效關(guān)系，生長(zhǎng)抑制率由5.23％增至61.20％。藥物濃度越高，抑制作用越強(qiáng)，呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系；系

3、列濃度NDGA作用于細(xì)胞24h、48h、72h，作用時(shí)間越長(zhǎng)，抑制作用越強(qiáng)，呈時(shí)間依賴性。高濃度NDGA可誘導(dǎo)HepG2凋亡，各組之間差異有顯著性(P<0.01)。根據(jù)中效方程式計(jì)算出72h的工C50值為128.37μmol/L。以給藥濃度為自變量，抑制率為因變量對(duì)作用不同時(shí)間的各組進(jìn)行回歸分析，顯示給藥濃度與抑制率呈明顯正相關(guān)，r24=0.965，P<0.01，48=0.902，P<0.01，r72=0.981，P<0.01。②熒光染

4、色法顯示NDGA作用HepG2細(xì)胞48h后染色，細(xì)胞體積縮小、形態(tài)變圓、胞膜皺縮呈毛刺狀、細(xì)胞內(nèi)含高度濃縮的染色質(zhì)胞核，部分呈核碎片狀，可見(jiàn)到核裂解成雙核。有較多的細(xì)胞脫落，懸浮于細(xì)胞液中。③透射電鏡可見(jiàn)細(xì)胞變圓縮小，細(xì)胞膜凹陷，偽足斷裂，微絨毛卷曲縮短、消失，典型的細(xì)胞核濃縮致密、凋亡小體形成的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。④流式細(xì)胞儀顯示，隨藥物濃度增加，細(xì)胞凋亡率顯著增加，經(jīng)NDGA 200μmol/L作用48h后早期凋亡率達(dá)41.6±2.3。

5、NDGA能引起肝癌細(xì)胞阻滯于S期，G0/G1期細(xì)胞比例下降。⑤RT-PCR檢測(cè)顯示NDGA明顯下調(diào)端粒酶-5-LOX、hTERTmRNA和bc1-2及上調(diào)bax的表達(dá)，存在一定的劑量依賴關(guān)系，各處理組與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：①脂氧合酶抑制劑NDGA對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2的體外生長(zhǎng)增殖具有抑制作用，呈劑量和時(shí)間依賴性效應(yīng)，同時(shí)可以阻滯細(xì)胞周期于S期。其作用機(jī)理可能式通過(guò)抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。②NDG