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文檔簡介
1、目的:
應用慢病毒介導的RNA干擾技術(shù),探討RNA干擾沉默fascin基因的表達對人膽管癌細胞QBC939體外增殖和凋亡的影響。
方法:
采用常規(guī)方法進行QBC939細胞的培養(yǎng),將其分為三組,實驗組轉(zhuǎn)染 fascin-shRNA慢病毒載體,非特異性對照組轉(zhuǎn)染shRNA陰性對照慢病毒載體,而空白對照組予以等量PBS緩沖液處理。RT-PCR及Western blot檢測各組中fascin mRNA水平和蛋白水平
2、的表達情況;通過流式細胞術(shù)PI單染檢測細胞周期,Annexin V和PI雙染檢測細胞凋亡。
結(jié)果:
1、Western blot檢測發(fā)現(xiàn),實驗組中fascin基因的蛋白水平表達明顯低于空白對照組及非特異性對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);
2、RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),實驗組fascin基因的mRNA水平表達明顯低于空白對照組及非特異性對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);
3、PI單染檢
3、測細胞周期發(fā)現(xiàn)實驗組細胞在 G1期所占比例明顯高于空白對照組及非特異性對照對照組,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05),并在實驗組中可見凋亡峰,凋亡率明顯高于其余兩組,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05);
4、Annexin V和PI雙染檢測細胞凋亡發(fā)現(xiàn)實驗組中凋亡率明顯高于非特異性對照組及空白對照組,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
結(jié)論:
1、慢病毒介導的shRNA能有效地沉默F(xiàn)ascin基因在膽管癌QBC
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