2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、植物病毒侵入寄主,先在細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制,經(jīng)過胞內(nèi)、胞間的橫向運(yùn)輸和維管束長距離徑向運(yùn)輸,才能成功系統(tǒng)侵染寄主。這個(gè)過程涉及病毒自身特異性編碼的運(yùn)動(dòng)蛋白(movement protein, MP)。研究表明,草莓鑲脈病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)編碼的P1蛋白是一個(gè)運(yùn)動(dòng)蛋白,但是病毒進(jìn)入寄主體內(nèi)如何進(jìn)行胞內(nèi)、胞間和長距離運(yùn)動(dòng)機(jī)制尚不明確。本課題分析和鑒定了MP蛋白的功能域,并研究了SVBV MP

2、蛋白的胞內(nèi)運(yùn)動(dòng)機(jī)制,為進(jìn)一步研究SVBV MP蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。
  1. SVBV MP蛋白功能域的預(yù)測
  利用軟件分析了SVBV MP蛋白的功能域,發(fā)現(xiàn)119 aa-233 aa為運(yùn)動(dòng)相關(guān)的關(guān)鍵區(qū)域,而30 aa-55 aa和283 aa-329aa是蛋白互作的關(guān)鍵區(qū)域。
  2. SVBV MP蛋白運(yùn)動(dòng)相關(guān)功能域的鑒定
  為了確定MP蛋白的功能域,構(gòu)建了3個(gè)缺失突變體pCV-MP?30-55-YFP

3、、pCV-MP?119-233-YFP、pCV-MP?283-329-YFP。
 ?。?)MP缺失突變體的亞細(xì)胞定位含pCV-MP-YFP、pCV-MP?30-55-YFP、pCV-MP?119-233-YFP、pCV-MP?283-329-YFP和pCV-YFP的農(nóng)桿菌浸潤本氏煙,發(fā)現(xiàn) MP及其突變體 MP?30-55和 MP?283-329均能夠定位在細(xì)胞壁上,而突變體MP?119-233定位在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核上。說明 MP蛋白

4、119 aa-233 aa區(qū)域是決定MP運(yùn)動(dòng)相關(guān)的功能域。
  (2) MP缺失突變體的運(yùn)動(dòng)回補(bǔ)功能含 pPVX-?P25-GFP、pPVX-?P25-GFP+pBin438、pPVX-?P25-GFP+pBin-MP?30-55、pPVX-?P25-GFP+pBin-MP?119-233和 pPVX-?P25-GFP+pBin-MP?283-329的農(nóng)桿菌浸潤本氏煙,發(fā)現(xiàn)MP、MP?30-55和MP?283-329能夠互補(bǔ)運(yùn)動(dòng)缺

5、陷型PVX載體,綠色熒光能從單個(gè)細(xì)胞向外擴(kuò)散至3-4個(gè)細(xì)胞乃至整個(gè)葉片。表明MP蛋白119 aa-233 aa是決定MP運(yùn)動(dòng)相關(guān)的功能域。
  3. SVBV MP蛋白與P4蛋白互作相關(guān)功能域的鑒定
  (1)酵母雙雜交驗(yàn)證互作功能域質(zhì)粒 pGBK-MP?30-55+pGAD-P4、pGBK-P4+pGAD-MP?30-55、pGBK-MP?119-233+pGAD-P4、pGBK-P4+pGAD-MP?119-233、pG

6、BK-MP?283-329+pGAD-P4和pGBK-P4+pGAD-MP?283-329分別共轉(zhuǎn)化酵母,發(fā)現(xiàn)pGBK-P4+pGAD-MP?119-233共轉(zhuǎn)化的酵母細(xì)胞能夠在選擇培養(yǎng)基上生長。表明MP30 aa-55 aa和283 aa-329 aa是與P4蛋白互作的關(guān)鍵功能域。
  (2)雙分子熒光互補(bǔ)驗(yàn)證互作功能域含pCV-nYFP-MP?30-55+pCV-cYFP-P4、pCV-nYFP-P4+pCV-cYFP-MP?

7、30-55、pCV-nYFP-MP?119-233+pCV-cYFP-P4、pCV-nYFP-P4+pCV-cYFP-MP?119-233、 pCV-nYFP-MP?283-329+pCV-cYFP-P4和pCV-nYFP-P4+pCV-cYFP-MP?283-329的農(nóng)桿菌分別共浸潤本氏煙,發(fā)現(xiàn)浸潤pCV-nYFP-MP?119-233+pCV-cYFP-P4農(nóng)桿菌的本氏煙表皮細(xì)胞中出現(xiàn)黃色熒光,說明SVBV MP30 aa-55 a

8、a和283 aa-329 aa是與P4蛋白互作的關(guān)鍵功能域。
  4. SVBV MP蛋白的胞內(nèi)定位
  含質(zhì)粒pCV-MP-YFP的農(nóng)桿菌浸潤本氏煙,發(fā)現(xiàn)MP蛋白形成的點(diǎn)顆狀物存在于細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)中,而且MP形成的點(diǎn)顆狀物在細(xì)胞質(zhì)中能夠沿著某種軌跡移動(dòng),最終定位于胞間連絲(PD)。表明 MP蛋白形成的點(diǎn)顆狀物在細(xì)胞質(zhì)中沿著某種軌跡靶向PD。
  5. SVBV MP蛋白與微管的共定位
  含質(zhì)粒pCV-MP-Y

9、FP和pCV-MT-RFP的農(nóng)桿菌共浸潤本氏煙,發(fā)現(xiàn)MP蛋白能夠和微管(MT)共定位。用微管抑制劑處理本氏煙表皮細(xì)胞后,再浸潤含質(zhì)粒pCV-MP-YFP和pCV-MP-YFP+MT-RFP的農(nóng)桿菌,發(fā)現(xiàn)MP蛋白任然能夠和微管(MT)共定位,只是靶向胞間連絲(PD)的MP蛋白數(shù)量明顯減少。表明SVBV MP蛋白靶向PD與細(xì)胞骨架微管的結(jié)構(gòu)有關(guān),但是微管不是MP蛋白胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)奈ㄒ煌緩健?br>  6. SVBV MP蛋白與微絲的共定位

10、>  含質(zhì)粒 pCV-MP-YFP和 pCAM-ABD2-GFP的農(nóng)桿菌共浸潤本氏煙,發(fā)現(xiàn)MP蛋白能夠和微絲(ABD2)共定位,說明SVBV MP蛋白靶向PD與細(xì)胞骨架微絲有關(guān)。
  7. SVBV MP蛋白與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的共定位
  含質(zhì)粒pCV-MP-YFP和pCV-ER-RFP的農(nóng)桿菌浸潤本氏煙,發(fā)現(xiàn)MP蛋白能夠和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)共定位,說明SVBV MP蛋白靶向PD與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有關(guān)。
  8. SVBV編碼蛋白間的互作

11、r>  質(zhì)粒 pGBK-P3+pGAD-P4和 pGBK-P4+pGAD-P3分別共轉(zhuǎn)化酵母,發(fā)現(xiàn)SVBV P3與P4蛋白互作。含pCV-nYFP-P2+pCV-cYFP-P3、pCV-nYFP-P3+pCV-cYFP-P2、 pCV-nYFP-P3+pCV-cYFP-P4和pCV-nYFP-P4+pCV-cYFP-P3的農(nóng)桿菌共浸潤本氏煙,發(fā)現(xiàn)P2和P3以及P3和P4能夠互作。說明SVBV包裹核酸形成的病毒粒子的CP蛋白(P4)能夠與

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