靶向Survivin通路的腫瘤基因治療.pdf

1、細(xì)胞凋亡在很多生命活動中發(fā)揮著重要作用。細(xì)胞凋亡紊亂往往是腫瘤發(fā)生的一個重要因素，因此細(xì)胞凋亡的研究為認(rèn)識和治療癌癥提供了重要依據(jù)。Survivin是IAP家族中的一個特殊成員，它特異性地在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)控細(xì)胞周期的功能。研究表明抑制內(nèi)源survivin表達(dá)能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，這為腫瘤治療提供了一種新途徑。 腫瘤基因治療的一個主要目的就是丌發(fā)出有效的基因載體，使得治療基因能夠受到嚴(yán)格調(diào)控并在特定組織表達(dá)。M

2、ifepristone／RU486調(diào)控系統(tǒng)具有很低的本底轉(zhuǎn)錄活性和很高的可誘導(dǎo)性，因此得到廣泛應(yīng)用。 本文的第一章優(yōu)化了這個調(diào)控系統(tǒng)，用人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子來控制反式調(diào)控子的表達(dá)。我們用這個系統(tǒng)在人結(jié)腸癌細(xì)胞中誘導(dǎo)表達(dá)Survivin的顯性抑制突變體(surDN)。結(jié)果顯示RU486可特異性的誘導(dǎo)surDN在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)并引發(fā)caspase依賴的凋亡和抑制腫瘤細(xì)胞生長，并與化療藥物具有聯(lián)合抑癌效應(yīng)。裸鼠腫瘤模型進(jìn)一步證明了這

3、個系統(tǒng)在腫瘤基因治療中的潛力。結(jié)果顯示誘導(dǎo)表達(dá)SUrDN能有效抑制腫瘤生長，提高荷瘤裸鼠的存活率。RU486與化療藥物cisplatin聯(lián)用能徹底抑制腫瘤的生長。 RaNA干擾是抑制基因表達(dá)的有力工具，具有特異性強(qiáng)和效率高等特點；而腺病毒載體具有轉(zhuǎn)染效率高和表達(dá)外源基因持續(xù)時間長等優(yōu)點。 本文的第二章將二者結(jié)合起來，構(gòu)建了表達(dá)靶向survivin siRNA的腺病毒載體。結(jié)果顯示，該腺病毒載體能夠抑制肝癌細(xì)胞內(nèi)survi

4、vin的表達(dá)，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡和抑制肝癌細(xì)胞生長。 溶瘤腺病毒能夠有選擇性的在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制并殺死腫瘤細(xì)胞。本文的第三章證明了survivin啟動子是一個腫瘤特異性啟動子并用它構(gòu)建了一種溶瘤腺病毒Ad.SP/E1A。Ad.SP/E1A能特異性的在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)E1A并引發(fā)細(xì)胞毒性。在荷瘤動物實驗中，瘤內(nèi)注射Ad.SP/E1A病毒能顯著抑制腫瘤生長。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)Ad.SP/E1A引起的細(xì)胞死亡是不通過凋亡途徑的。因此Ad.S