TGF-β1-H2O2增強LuminalA型乳腺癌細胞T-47D抗失巢凋亡潛能.pdf

1、目的：初步探討TGF-β1/H2O2增強Luminal-A型乳腺癌細胞T-47D的抗失巢凋亡潛能。
　　方法：（1）細胞培養(yǎng)：按照實驗設(shè)計分組并在相應(yīng)時間加入誘導因子或者信號通路抑制劑，收集細胞用于后續(xù)實驗研究；（2）空白對照組與各實驗組使用軟瓊脂集落形成實驗和流式細胞儀檢測Luminal-A型乳腺癌細胞T-47D的抗失巢凋亡能力；（3）Real-time PCR和Western blot用于檢測抗失巢凋亡相關(guān)基因mRNA和蛋白質(zhì)

2、的表達水平；（4）Western blot檢測與抗失巢凋亡相關(guān)的信號途徑；（5）使用SNAI2 shRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染T-47D細胞，沉默SNAI2的表達；（6）裸鼠尾靜脈注射CFSE標記的腫瘤細胞T-47D，冰凍切片后，觀察肺內(nèi)轉(zhuǎn)移的乳腺癌細胞滯留情況。
　　結(jié)果：（1）經(jīng)過TGF-β1/H2O2誘導，流式細胞儀和軟瓊脂集落形成實驗的實驗結(jié)果顯示，TGF-β1/H2O2組相對于control組、H2O2組、TGF-β1組發(fā)生凋

3、亡的細胞百分數(shù)顯著減少，同時計數(shù)多個視野取平均值后所得的細胞克隆數(shù)增多具有統(tǒng)計學意義；（2）經(jīng)過H2O2、TGF-β1、TGF-β1/H2O2誘導后，TGF-β1/H2O2組相對于control組、TGF-β1組、H2O2組的TGF-βRⅡ、SNAI2和Bcl-2的表達上調(diào)具有顯著統(tǒng)計學意義；（3）TGF-β1/H2O2通過ERK1/2的激活調(diào)節(jié)TGF-βRⅡ和SNAI2的表達；（4）在SNAI2 shRNA慢病毒載體沉默SNAI2表達

4、后，Western blot檢測發(fā)現(xiàn)TGF-β1/H2O2誘導后，Bcl-2和TGF-βRⅡ的表達上調(diào)被阻斷；（5）與體外實驗一致，裸鼠尾靜脈注射CFSE標記的T-47D細胞后，TGF-β1/H2O2誘導可以顯著增加獲得抗失巢凋亡能力的T-47D腫瘤細胞外滲進入肺組織；（6）使用SNAI2 shRNA慢病毒載體沉默SNAI2的表達后，經(jīng)過TGF-β1/H2O2誘導，TGF-β1/H2O2 SNAI2 shRNA組相對于control S