候選抑癌基因CHD5在乳腺癌中的遺傳分析及初步功能研究.pdf

1、乳腺癌是一種十分常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年上升，并呈年輕化的趨勢(shì)，極大地威脅著女性的健康。近年來(lái)，盡管已發(fā)現(xiàn)很多乳腺癌相關(guān)的癌基因及抑癌基因，但癌癥的總體治愈水平并沒(méi)有顯著上升。因此，發(fā)現(xiàn)和研究新的乳腺癌相關(guān)基因，尋找到新的診斷及治療靶點(diǎn)，是一項(xiàng)十分迫切且具有重要現(xiàn)實(shí)意義的工作。
　　 已有大量文獻(xiàn)報(bào)道，人類(lèi)染色體1p36區(qū)在乳腺癌及其它多種類(lèi)型的癌癥病人中均發(fā)生缺失，提示該區(qū)域內(nèi)存在一個(gè)重要的候選抑癌基因。染色質(zhì)解旋酶DNA

2、結(jié)合蛋白5(CHD5)是Brodeur實(shí)驗(yàn)室2003年新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)基因，位于染色體1p36區(qū)。2007年，Bagchi等通過(guò)對(duì)小鼠模型的研究證實(shí)，CHD5是1p36區(qū)的抑癌基因。至此，該基因受到越來(lái)越多的關(guān)注，各類(lèi)癌癥中關(guān)于該基因的研究工作也相繼發(fā)表。但乳腺痛中，對(duì)該基因的研究還不多見(jiàn)，它和乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系有待于進(jìn)一步探討。
　　 研究?jī)?nèi)容：
　　 本文首先運(yùn)用PCR擴(kuò)增、測(cè)序的方法，檢測(cè)了19個(gè)乳腺癌細(xì)胞系及38個(gè)

3、乳腺癌組織樣本中，CHD5基因40個(gè)編碼蛋白的外顯子區(qū)及其兩側(cè)剪切位點(diǎn)的突變情況；然后，運(yùn)用real－time PCR手段檢測(cè)了32個(gè)乳腺癌細(xì)胞系及58對(duì)乳腺癌組織樣本中(包括腫瘤組織及相應(yīng)的癌旁正常組織)CHD5 mRNA表達(dá)水平，并分析了CHD5 mRNA表達(dá)水平和各項(xiàng)臨床病例指標(biāo)問(wèn)的相互關(guān)系。接著，運(yùn)用亞硫酸氫鈉處理DNA、PCR擴(kuò)增并測(cè)序的方法，檢測(cè)了9個(gè)乳腺癌細(xì)胞系及30個(gè)乳腺癌組織樣本中CHD5基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化情況；最后

4、，在MDA－MB-231乳腺癌細(xì)胞系中重新表達(dá)CHD5，運(yùn)用SRB染色、PI染色及流式細(xì)胞儀等手段，檢測(cè)該細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的變化。
　　 研究結(jié)果：
　　 在MDA—MB-231乳腺癌細(xì)胞系中檢測(cè)到一個(gè)移碼突變，位于CHD5染色質(zhì)解旋酶/ATP酶結(jié)構(gòu)域。組織樣本中沒(méi)有檢測(cè)到突變，只發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的SNP位點(diǎn)；約63％的乳腺痛細(xì)胞系及乳腺癌組織樣本中，CHD5 mRNA表達(dá)水平均顯著下調(diào)；乳腺癌細(xì)胞系及組織樣本中，CHD5基

5、因啟動(dòng)子區(qū)均存在高甲基化，說(shuō)明甲基化而非突變是導(dǎo)致CHD5轉(zhuǎn)錄失活的主要原因。另外，在MDA-MB-231中重新表達(dá)CHD5后，該細(xì)胞增殖變慢。流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，G0/G1期細(xì)胞比例增加，S期和G2/M期細(xì)胞比例相應(yīng)減少，表明CHD5可以將細(xì)胞阻滯在S期。
　　 結(jié)論：
　　 本文首次系統(tǒng)研究了乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，CHD5基因分子水平的變化情況，初步檢測(cè)了該基因?qū)?xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明，乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，CHD