P物質及其受體NK-1在乳腺癌中的表達及作用.pdf

1、已有研究證實在乳腺癌組織及某些乳腺癌細胞系中存在PPT-A和神經(jīng)激肽1(neurokinin-1，NK-1) mRNA的擴增，但目前對于P物質(substanceP，SP)及NK-1在乳腺癌組織及人乳腺癌細胞系中的表達及細胞學定位尚不清楚，亦未見有關NK-1特異性激動劑[Sar9，Met(02)11]substance P(SMSP)和NK-1特異性拮抗劑SR140333對乳腺癌生長增殖的影響作用的研究報道。目的1.研究P物質及其受體N

2、K-1在乳腺癌組織及T47D細胞系中的表達特點；2.研究SMSP以及SR140333對體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞系T47D生長增殖的影響；3.探討P物質和NK-1在乳腺癌的發(fā)生及生長增殖過程中的作用。方法采用免疫組織化學染色研究P物質和NK-1在乳腺癌組織的表達及臨床病理特點；同時采用免疫組化染色檢測二者在乳腺癌癌旁組織以及非典型增生（n=5）、導管內乳頭狀瘤（n=3）、腺病(n=6)和纖維腺瘤(n=5)等病變組織中的表達情況：采用免疫細胞

3、化學染色了解二者在體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞系T47D中的表達特點；采用MTT比色法檢測不同濃度的SMSP和SR140333單獨和共同作用后T47D細胞活性的變化；采用流式細胞術檢測SR140333作用后T47D細胞線粒體膜電位的變化；采用Hoechst33258熒光染色及HE染色觀察SR140333作用后細胞的凋亡情況以及形態(tài)學變化；采用MTT比色法及細胞計數(shù)法比較SMSP和SR140333單獨作用后T47D細胞的生長曲線。結果在乳腺癌組

4、織以及T47D細胞系中P物質和NK-1均呈陽性表達；P物質剛性顆粒位于腫瘤細胞胞漿，而NK-1主要位于腫瘤細胞胞膜，也可存在于細胞漿；二者在乳腺癌組織中表達水平同乳腺癌的分化程度相關；在乳腺癌組織及癌旁組織的血管內皮細胞中NK-1呈剛性表達，而在良性病變組織中的血管卻為陰性；乳腺導管上皮非典型增生中P物質和NK-1呈弱剛性表達，而在腺病變和纖維腺瘤中均為陰性；3例導管內乳頭狀瘤中，2例NK-1呈弱陽性；SMSP的濃度從10-10 M到1

5、0-7M時它可以促進T47D細胞系的生長增殖，濃度為10-8M時其促增殖作用最明顯，而到達10-6M時反而抑制T47D細胞系的增殖；SR140333從10-9M到10-5M時能夠減緩并抑制T47D細胞系的增殖，并且這種影響作用呈劑量依賴性；HE染色及Hoechst33258熒光染色證明SR140333作用后可以引起T47D細胞系增殖減緩并發(fā)生凋亡，流式細胞術測定證明線粒體誘導途徑參與了T47D細胞的凋亡過程；兩種試劑單獨作用后第3天起，

6、SMSP可以明顯加快T47D細胞的生長而SR140333從第4天起可以減緩其生長：SMSP同SR140333合用時，10-6M的SR140333能夠抑制10-8M的SMSP引起的細胞增殖作用。結論該研究提示神經(jīng)內分泌因素參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程，并為乳腺癌的診斷及鑒別診斷提供了新的免疫組化指標。此外，本研究還證實了SR140333可以通過阻斷NK-1在體外培養(yǎng)的乳腺癌細胞系中可以發(fā)揮生長抑制作用，這提示NK-1可以做為乳腺癌新的治療靶