MICA分子在NK細(xì)胞殺傷乳腺癌中的作用.pdf

1、【目的】：觀察乳腺腫瘤細(xì)胞膜MHC I鏈相關(guān)分子A(MtlC class I chain-related gene A，MICA)及血清中可溶性MICA表達(dá)，探討膜型MICA與可溶性MICA對(duì)NK細(xì)胞活化性受體NKG2D的作用。探討MICA在NK細(xì)胞殺傷乳腺癌中的作用。 【方法】：1．使用德國美天旎公司MACS系統(tǒng)，NK細(xì)胞分選試劑盒負(fù)向分選高純度NK細(xì)胞。2．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)乳腺腫瘤細(xì)胞與組織膜型MICA(mMICA)及NK細(xì)胞

2、表面NKG2D表達(dá)，觀察膜型MICA、可溶性MICA(sMICA)及IL-15對(duì)NKG2D表達(dá)的影響；RT-PCR檢測(cè)乳腺腫瘤組織膜型MICA表達(dá)；免疫組織化學(xué)檢測(cè)乳腺腫瘤組織膜型MICA以及可溶性MICA的表達(dá)及分布；ELIsA方法檢測(cè)乳腺腫瘤患者外周血可溶性MICA的分泌。3．應(yīng)用抗體封閉法觀察膜型MICA與NKG2D相互作用。4.MTT法檢測(cè)NK細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷活性。 【結(jié)果】：1．乳腺細(xì)胞膜MICA在正常組織不表達(dá)

3、，在良性腫瘤表達(dá)量為(38.5±7.5)％，惡性腫瘤表達(dá)量為(53.2±5.6)％。2．可溶性MICA含量在健康成年人為陰性，在乳腺良性腫瘤患者血清中含量(76.8±22.3)pg/ml，在惡性腫瘤患者血清中含量(205.36±71.27)pg/ml。而且可溶性MICA含量高低在乳腺癌中與TNM分期正相關(guān)。3．經(jīng)NKG2D或MICA抗體封閉后，NK細(xì)胞的殺瘤活性顯著減弱，從(76.5±11.8)％，分別降到NKG2D抗體封閉后的(31.

4、6±2.2)％、MICA抗體封閉后的(29.8±1.9)％、NKG2D與MICA抗體共封閉后的(25.9±1.8)％；含可溶性MICA的血清可明顯下調(diào)NKG2D的表達(dá)，從初始的(92.5±7.5)％降到(62.5±7.6)％，進(jìn)而下調(diào)NK細(xì)胞的殺瘤活性，從初始的(76.2±10.5)％降到(49.9±10.14)％。4.NK細(xì)胞與乳腺癌細(xì)胞株MCF-7共孵育23-24h后，NKG2D的表達(dá)升高，由0h的(55.12±2.4)％上升至(8

5、1.18±4.7)％。IL-15促NK細(xì)胞NKG2D的表達(dá)升高，從未加IL-15的(54.9±6.8)提高到(83.7±5.6)％，進(jìn)而提高NK細(xì)胞的殺瘤活性，從未加IL-15的(46.5±6.3)％提高到(63.5±4.8)％。 【結(jié)論】：1．大部分乳腺腫瘤細(xì)胞膜都有MICA的表達(dá)，而正常組織不表達(dá)，可作為乳腺腫瘤相關(guān)性抗原。2．NK細(xì)胞受體NKG2D與腫瘤細(xì)胞膜MICA的相互識(shí)別在NK細(xì)胞抗乳腺癌中起重要作用。3．可溶性MI