Notch1、c-myc及p21在乳腺癌中的表達(dá)及冬凌草甲素對(duì)乳腺癌Bcap-37細(xì)胞的作用研究.pdf

1、本研究分為二部分，第一部分，目的:探討notch1、c-myc及p21蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)情況及其與臨床病理的關(guān)系,分析其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用,為乳腺癌臨床藥物治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:采用免疫組化S-P法檢測(cè)notch1、c-myc及p21蛋白在60例乳腺癌組織和18例乳腺良性病變組織中的表達(dá),分析它們的表達(dá)情況與患者臨床病理的關(guān)系以及notch1、c-myc和p21蛋白表達(dá)的相關(guān)性。
　　 結(jié)果:not

2、ch1、c-myc和p21蛋白在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為45.00％(27/60)、60.00％(36/60)和58.33％(35/60),與乳腺良性病變組織的陽(yáng)性表達(dá)率11.11％(2/18)、22.22％(4/18)、27.78％(5/18)相比有非常顯著差異(P<0.01)。其中,notch1蛋白表達(dá)強(qiáng)度與乳腺癌的病理分級(jí)呈顯著相關(guān)性(P<0.05),與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈非常顯著相關(guān)(P<0.01),與年齡及腫瘤的大小無關(guān)；c-m

3、ye蛋白與乳腺癌病理分級(jí)、年齡、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性；p21蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著負(fù)相關(guān)性(P<0.05),與病理分級(jí)、年齡及腫瘤大小無關(guān)。notch1與c-myc蛋白在乳腺癌中的表達(dá)呈非常顯著的相關(guān)性(P<0.01)。
　　 結(jié)論:notch1、c-myc及p21蛋白在乳腺癌組織中的的陽(yáng)性表達(dá)均高于在乳腺良性病變組織中的表達(dá),提示三者在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮一定的作用。notch1蛋白的表達(dá)與乳腺癌病理分級(jí)呈顯

4、著的相關(guān)性,與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移亦呈非常顯著相關(guān)性,表明notch1蛋白的表達(dá)可能與乳腺癌的惡性程度相關(guān),對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的判斷有一定的幫助。
　　 第二部分：
　　 目的:觀察冬凌草甲素(Oridonin,Ori)對(duì)乳腺癌Bcap-37細(xì)胞增殖的抑制作用并探討其機(jī)制。
　　 方法:四氮唑藍(lán)(methy1 thiazoly1 tetrazolium,MTT)法觀察Ori對(duì)乳腺癌Bcap-37細(xì)胞增殖的影響；相差顯微鏡、H

5、oechst33258熒光染色觀察Ori作用前后Bcap-37細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；流式細(xì)胞儀檢測(cè)Ori對(duì)Bcap-37細(xì)胞周期的影響；RT-PCR檢測(cè)Ori作用前后Bcap-37細(xì)胞中notch1、c-myc、p21、cdc2及cyclinB1 mRNA表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:Ori對(duì)乳腺癌Bcap-37細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖有明顯抑制作用,呈濃度和時(shí)間依賴性。相差顯微鏡觀察給藥后Bcap-37細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變形。Hoechst332

6、58熒光染色觀察到給藥后部分細(xì)胞出現(xiàn)胞核染色質(zhì)不均,呈顆粒狀熒光等凋亡特征性改變。流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示給藥后細(xì)胞被阻滯在G2/M期,其20μmol/L濃度組變化最明顯。RT-PCR分析顯示,Ori作用后Bcap-37細(xì)胞p21mRNA表達(dá)水平上調(diào),cyclinB1、cdc2、c-myc及notch1 mRNA表達(dá)水平下調(diào)。
　　 結(jié)論:冬凌草甲素可顯著抑制乳腺癌Bcap-37細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)Bcap-37細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯、凋