細(xì)粒棘球蚴重組鐵蛋白和重組mMDH的免疫保護(hù)性差異機(jī)制的研究.pdf

1、目的:通過(guò)對(duì)具有免疫保護(hù)力的重組鐵蛋白和不具有免疫保護(hù)力的重組mMDH蛋白的比較分析，從而找出小鼠被疫苗免疫后產(chǎn)生免疫保護(hù)和抗細(xì)粒棘球蚴的機(jī)制，為疫苗的廣泛應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法：（1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：選取雌性ICR小鼠隨機(jī)分為3組：rEg.ferritin免疫組、rEg.mMDH免疫組和對(duì)照組；（2）動(dòng)物免疫：rEg.ferritin和rEg.mMDH免疫組小鼠分別注射10μg重組抗原+佐劑＋PBS，100μl，共三次，每次間隔兩周，對(duì)

2、照組注射100μlPBS；（3）動(dòng)物攻擊感染：第3次免疫后2周，各組均以1500個(gè)活的原頭蚴/每只小鼠攻擊感染；（4）免疫保護(hù)力觀察：攻擊感染20周后剖殺小鼠，統(tǒng)計(jì)小鼠腹腔內(nèi)包囊數(shù)量和直徑，計(jì)算免疫保護(hù)力。（5）脾細(xì)胞懸液的制備：剖殺小鼠，無(wú)菌取脾，分離脾細(xì)胞；（6）用分離得到的脾細(xì)胞，應(yīng)用FCM檢測(cè)CD4+和CD8+T細(xì)胞亞群的百分比變化。（7）用MTT法檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞增殖情況。（8）獲得數(shù)據(jù)后對(duì)具有免疫保護(hù)力和不具有免疫保護(hù)力的兩組

3、進(jìn)行對(duì)照比較，分析其內(nèi)在機(jī)制。結(jié)果：（1）根據(jù)Dempster公式計(jì)算：rEg.ferritin抗原免疫ICR小鼠可獲得86.37％的免疫保護(hù)力，而rEg.mMDH抗原免疫ICR小鼠未獲得免疫保護(hù)力，提示rEg.ferritin具有疫苗的潛質(zhì)，而rEg.mMDH則無(wú)。（2）免疫組與對(duì)照組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)比較：①rEg.ferritin免疫組小鼠在剖殺前CD4+T細(xì)胞增加（P﹤0.01），CD8+T細(xì)胞無(wú)明顯變化（P﹥0.05），而rEg.m

4、MDH免疫組小鼠脾淋巴細(xì)胞亞群與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化，提示rEg.ferritin免疫小鼠的保護(hù)機(jī)制有CD4+T細(xì)胞的參與，CD8+T細(xì)胞的作用不是很大；②MTT法檢測(cè)證實(shí)rEg.ferritin免疫的小鼠在rEg.ferritin刺激下脾淋巴細(xì)胞增殖水平明顯高于對(duì)照組（P<0.01），而rEg.mMDH無(wú)明顯作用（P﹥0.05），提示rEg.ferritin抗原免疫小鼠的保護(hù)機(jī)制可能與其刺激脾淋巴細(xì)胞增殖有關(guān)。結(jié)論：rEg.ferri