銀杏內(nèi)酯B改善缺血-再灌注損傷離體大鼠心肌收縮功能.pdf

1、目的:觀察銀杏內(nèi)酯B預(yù)處理和后處理對缺血-再灌注損傷的離體大鼠心臟和單個心肌細(xì)胞收縮功能的影響。以心功能、心肌梗死面積、酶學(xué)、單個心肌細(xì)胞的收縮功能以及凋亡蛋白、抗凋亡蛋白表達(dá)為指標(biāo)，研究銀杏內(nèi)酯B預(yù)處理后處理對心臟和心肌缺血-再灌注損傷時發(fā)揮的作用。從而為臨床治療心肌-再灌注損傷提供了理論基礎(chǔ)、實(shí)驗(yàn)依據(jù)和一種新的藥物治療。
　　 方法:
　　 1. 清潔級成年雄性SD大鼠，預(yù)處理組隨機(jī)分為正常對照組（Control），

2、缺血-再灌注損傷組(IR)和銀杏內(nèi)酯B預(yù)處理組（GB），離體心臟掛在Langendorff裝置，心臟穩(wěn)定30min后：Control組離體心臟持續(xù)灌注130min；IR離體心臟缺血30min復(fù)灌120min；GB組進(jìn)行銀杏內(nèi)酯B預(yù)處理10min后再缺血30min復(fù)灌120min。后處理組心臟穩(wěn)定30min后：Control組心臟再持續(xù)灌注90min；IR組心臟進(jìn)行缺血30min復(fù)灌90min；GB組缺血30min，復(fù)灌前10min用銀杏

3、內(nèi)酯B處理，再灌流80min。同時檢測大鼠離體心功能的變化。預(yù)處理各組復(fù)灌5min時和后處理復(fù)灌15min時，留取冠脈流出液待測LDH含量。冷凍心臟，測量各組心臟的心肌梗死面積。
　　 2. 進(jìn)一步酶解法分離正常雄性SD大鼠心臟，得單個心室肌細(xì)胞，并進(jìn)行培養(yǎng)。預(yù)處理組：Control組正常孵育11h；IR組培養(yǎng)6h后，行缺氧3h復(fù)氧2h模擬缺血-再灌注損傷；GB組加入不同濃度的銀杏內(nèi)酯B進(jìn)行預(yù)處理6h，行缺氧3h復(fù)氧2h模擬缺血

4、-再灌注損傷。后處理組：Control組正常孵育7h；IR組孵育2h后，行缺氧3h復(fù)氧2h模擬缺血-再灌注損傷；GB組先孵育2h后，行缺氧3h，再復(fù)氧2h時加入不同濃度的銀杏內(nèi)酯B進(jìn)行后處理。最后測定這些細(xì)胞異丙腎上腺素刺激(isoproterenol，ISO)狀態(tài)下收縮幅度，收縮時間和舒張90％的時間，收集各組心肌細(xì)胞，Western blot檢查bcl-2和bax蛋白表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、預(yù)處理結(jié)果：與

5、正常組相比較，缺血-再灌注能夠明顯地降低離體心功能的各種參數(shù)，增加冠脈流出液中LDH 的釋放量，加重了心肌梗死。而GB可減輕心肌損傷，改善大鼠心功能，減少LDH的釋放，降低心肌梗死面積。而在細(xì)胞水平上，模擬缺血-再灌注損傷顯著降低了心肌細(xì)胞ISO刺激收縮幅度，延長了收縮時間，縮短了舒張時間，并降低了bcl-2的表達(dá)，增加了bax的表達(dá)，使得bax/bcl-2的值增加。而用不同濃度的GB預(yù)處理以后能夠不同程度地抑制細(xì)胞收縮幅度的降低，縮短

6、收縮時間，延長舒張時間，降低了bax/bcl-2的值。
　　 2、后處理結(jié)果：銀杏內(nèi)酯B后處理也能減輕心肌損傷，改善大鼠心功能，減少LDH的釋放，降低心肌梗死面積，但沒有預(yù)處理效果好。而在細(xì)胞水平上，不同濃度的銀杏內(nèi)酯B后處理也能夠抑制心肌細(xì)胞的收縮幅度的降低，縮短收縮時間，延長舒張時間。
　　 結(jié)論:
　　 1、銀杏內(nèi)酯B預(yù)處理能夠改善離體大鼠心肌缺血-再灌注損傷，具有保護(hù)作用。
　　 2、銀杏內(nèi)酯B后