復(fù)方丹參注射液保護(hù)離體缺血再灌注大鼠心肌的研究.pdf

1、研究目的 心肌缺血再灌注損傷(Ischemiareperfusioninjury，IRI)是指短時(shí)間內(nèi)，心肌血供中斷一定時(shí)間后恢復(fù)血液供應(yīng)，原缺血心肌發(fā)生較血液供應(yīng)恢復(fù)前更嚴(yán)重的損傷。在臨床上，表現(xiàn)為閉塞的冠狀動(dòng)脈再通一定時(shí)間后，病人發(fā)生血壓驟降，心功能不全，心律不齊或者猝死等一系列病情發(fā)生惡化的現(xiàn)象。對(duì)于心肌缺血再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制還沒有完全清楚，比較公認(rèn)的有：鈣超載，氧自由基和活化的中性白細(xì)胞的作用。對(duì)于心肌缺血再灌注損傷中損傷性

2、因素的研究，可以為缺血再灌注損傷找到有效的防治途徑。研究表明，細(xì)胞內(nèi)鈣超載在心肌缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制中起重要作用。 第一部分：將12只大鼠隨機(jī)分成2組，對(duì)照組即Krebs液灌注20分鐘后缺血30分鐘，再灌注30分鐘。實(shí)驗(yàn)組即含有復(fù)方丹參注射液的Krebs液灌注20分鐘后，缺血30分鐘，再灌注30分鐘。觀察離體大鼠心臟的血流動(dòng)力學(xué)的變化，以及發(fā)生缺血再灌注后心肌乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase，LDH)的變化

3、和心肌梗死面積的變化，來評(píng)價(jià)復(fù)方丹參注射液對(duì)離體大鼠心肌的保護(hù)作用。 第二部分：再灌注結(jié)束后，提取心肌肌漿網(wǎng)(sarcoplasmicreticulum，SR)，觀察對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組大鼠心肌肌漿網(wǎng)依賴鈣離子ATP酶(sarcoplasmicreticulumcalciumATPaseSERCA)攝取鈣離子能力的變化，以解釋丹參減輕細(xì)胞內(nèi)發(fā)生鈣超載的可能機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法 第一部分：(1)大鼠用乙醚麻醉后迅速取出心臟，1分鐘

4、之內(nèi)接到Langendorff裝置上進(jìn)行灌流。灌流液使Krebs-Henseleit液，同時(shí)給予95％的氧氣和5％的二氧化碳混合氣體。分別接受主動(dòng)脈的泵出液和心肌的冠狀動(dòng)-1-脈的回流液。(2)用紫外分光光度計(jì)，測(cè)定LDH的活性(3)TTC方法染色，觀察心肌再灌注損傷的情況第二部分：提取SR，測(cè)定蛋白濃度，根據(jù)SERCA攝取鈣離子反應(yīng)體系的要求，加入相應(yīng)的反應(yīng)物和離子，借助紫外分光光度計(jì)，觀察SERCA鈣攝取的變化。反應(yīng)溫度25℃，檢測(cè)

5、波長(zhǎng)710nm，檢測(cè)間隔0.1秒。時(shí)間100秒。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 第一部分：1.對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組血流動(dòng)力學(xué)的變化比較對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的12只大鼠的心率(273±28.33vs.280±22.54，P＞0.05)在250-300次/分左右，收縮壓在(81.16±21.26vs.80.35±19.23，P＞0.05)在70-100mmHg的范圍之內(nèi)，全部符合離體大鼠心臟Langendorff灌注的血流動(dòng)力學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。 對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的血

6、流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)如心率(heartrate，HR)，分別在5分鐘(262.4±7.7vs.265.3±10.2，P＞0.05)，10分鐘(256.9±14.5vs.264.2±19.5，P＞0.05)，15分鐘(243.8±18.5vs.262.6±20.1，P＞0.05)，20分鐘(247.9±15.2vs.263.7±19.6，P＞0.05)組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組收縮壓(systolicpressure，SP)，分別在5分鐘(

7、81.2±8.4vs.82.4±10.2，P＞0.05)，10分鐘(79.4±14.5vs.79.6±17.3，P＞0.05)，15分鐘(80.1±18.5vs.78.6±20.1，P＞0.05)，20分鐘(78.8±15.2vs.78.9±19.6，P＞0.05)組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組冠狀動(dòng)脈流量(coronaryarteryflux，CF)，在5分鐘(14.1±8.4vs.14.6±6.8，P＞0.05)時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1

8、0分鐘(13.7±10.5vs16.6±15.8，P＜0.05)，15分鐘(13.1±14.2vs.17.4±18.3，P＜0.05)，20分鐘(13.3±12.2vs.18.8±20.8，P＜0.05)組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組心輸出量(cardiacoutput，CO)在5分鐘(53.0±8.4vs.52.0±6.8，P＞0.05)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。10分鐘(51.7±10.5vs.57.2±15.8，P＜0.05)，15分鐘(

9、5L0±14.2vs.58.8±18.3，P＜0.05)，20分鐘(50.6±12.2vs.59.8±20.8，P＜0.05)組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 在30分鐘缺血中，心臟在保溫裝置中，溫度保持在37℃。 2.再灌注后對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組CF中LDH的變化再灌注后，對(duì)照組冠狀動(dòng)脈流出液中的LDH活性高于實(shí)驗(yàn)組(136.7±13vs.30.6±6.2，P＜0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.再灌注后對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組

10、心肌梗死面積的比較對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的心臟在再灌注后，用TTC染色的方法檢測(cè)梗死面積的變化，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的心肌均出現(xiàn)了心肌梗死區(qū)，對(duì)照組的心肌梗死面積的百分比更大(30±4.76％)，實(shí)驗(yàn)組的梗死面積百分比在(18±2.39％)的范圍之內(nèi)，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 第二部分：對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組鈣攝取的變化鈣離子攝取通過紫外分光光度計(jì)的檢測(cè)，攝取集中表現(xiàn)在啟動(dòng)反應(yīng)后的60秒之內(nèi)，在最初的20秒的范圍內(nèi)上升最快，隨后上升的速度逐漸減慢

11、，最后到達(dá)平臺(tái)期。隨時(shí)間的變化，吸光度增加代表了SERCA攝取鈣離子增加的變化趨勢(shì)，這種趨勢(shì)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行曲線回歸，回歸后的方程和相關(guān)系數(shù)R2，對(duì)照組：y=15.589Ln(x)-3.117，R2=0.9965；實(shí)驗(yàn)組：y=21.770Ln(x)-3.6841，R2=0.9949。對(duì)鈣攝取的初速度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其初速度V0(5.34±2.10vs.7.4±1.91，P＜0.05)。 結(jié)論： 1復(fù)方丹參注射液可以增加離體大鼠心

12、臟心輸出量和冠狀動(dòng)脈流量；而對(duì)收縮壓和心率沒有明顯改觀。 2復(fù)方丹參注射液可以顯著減少離體大鼠心臟缺血再灌注后LDH的釋放，減小再灌注對(duì)心肌的損傷。 3復(fù)方丹參注射液可以明顯減小離體大鼠心臟缺血再灌注損傷后心肌的梗死面積，降低心肌的損傷程度，起到保護(hù)心肌的作用。 4復(fù)方丹參注射液可以增加SERCA攝取鈣離子的能力，減少再灌注后細(xì)胞內(nèi)的鈣離子，在一定程度上減輕鈣超載，減小再灌注對(duì)離體大鼠心肌的損傷，起到保護(hù)心肌的作