p21激活激酶1的激活肽段對血管緊張素Ⅱ所誘導(dǎo)的心肌肥厚與心律失常的抑制與改善作用.pdf

1、目的:探討p21激酶1的激活肽段在體內(nèi)和體外對血管緊張素Ⅱ引起的心肌肥大及相關(guān)心律失常的作用。
　　方法:p21激活激酶1的激活肽段（PAP）TSNSQKYMSFTDKSA來自于p21激活激酶自抑制區(qū)并且被連接到來源于人類免疫缺陷病毒-1反式激活的調(diào)控蛋白的十一氨基酸序列YGRKKRRQRRR上。肽段YGRKKRRQRRRGTSNSQKYMSFTDKSA合成于美國伊利諾依大學(xué)芝加哥分校研究中心，并被質(zhì)譜分析證實。乳鼠心肌細(xì)胞分離自

2、新生一至兩天的大鼠，乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)在層粘連蛋白處理過的玻片上。為了研究PAP在乳鼠心肌細(xì)胞內(nèi)對血管緊張素II引起的心肌肥大的作用，分別用伴有或者不伴有PAP的血管緊張素II刺激乳鼠心肌細(xì)胞，未經(jīng)任何處理的乳鼠心肌細(xì)胞用作對照，細(xì)胞培養(yǎng)48小時后將細(xì)胞取出，倒掉培養(yǎng)液，一部分細(xì)胞用福爾馬林固定，封閉肌動蛋白α抗體后用熒光顯微鏡拍片，另一部分細(xì)胞收集后用裂解液裂解細(xì)胞，提取蛋白質(zhì)，測定蛋白濃度，然后用于免疫印跡實驗。本實驗選擇體重在22.

3、0～27.9g，3個月左右大小的雄性C57BL/6小鼠（Wild Type，WT）為實驗對象，將小鼠隨機(jī)分為3組，描記心電圖后記錄PR間期，P波時長，QRS間期以及QT間期，然后分別使用滲透微型泵給予使用血管緊張素Ⅱ、血管緊張素Ⅱ伴有PAP、生理鹽水，一周以后再次描記心電圖，使用頸椎脫位的方法處死老鼠，切除稱量心臟重量（HW），測量脛骨長度（TL）計算其比值（HW/TL）。將取出的心臟主動脈插管后裝在Langendorff系統(tǒng)上瀼注心臟

4、，分別使用程序電刺激S1S2和分級遞增法S1S1電刺激左心室，使用多電極陣列繪制左心室心外膜電流圖，并且記錄左心室發(fā)生室性心律失?；蛘咝氖翌潉拥碾娏鞔笮?。瀼注結(jié)束后將心臟取下OCT冰凍并切片，使用HE染色分析計算細(xì)胞平均大小；使用免疫熒光抗體檢測連接蛋白43的形狀及分布。
　　結(jié)果：1.p21激活激酶1的激活肽段在心肌細(xì)胞中可以增強(qiáng)p21激活激酶活性。
　　2.p21激活激酶1的激活肽段可以在體內(nèi)和體外抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的

5、心肌
　　肥大并在血管緊張素Ⅱ引起的心律失常中起保護(hù)作用。
　　3.PAPs可以改善血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心肌肥厚相關(guān)性鈣火花和鈣波以及非同步鈣瞬變
　　結(jié)論:p21激活激酶1的激活肽段可以在C57BL/6野生型小鼠體內(nèi)外抑制血管緊張素酶Ⅱ引起的心肌肥大及相關(guān)心律失常，它很有可能是通過多個途徑作用于室性心律失常的基質(zhì)和觸發(fā)因素從而發(fā)揮抗室性心律失常的作用。實驗結(jié)果表明，通過生物活性肽段激活P21激活激酶可能是一種治療心肌肥