Peroxiredoxin-1對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)心肌肥大影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　本研究創(chuàng)新性地觀察新型過氧化物酶Peroxiredoxin-1(Prx-1)在血管緊張素II(Angiotensin II,Ang II)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大中的表達(dá)，及高表達(dá)Prx-1對Ang II誘導(dǎo)的活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）、Akt通路激活及心肌肥大的影響，以探討Ang II是否通過ROS及其介導(dǎo)的Akt細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大。并首次探討Prx-1是否通過抑制RO

2、S/Akt通路來抑制Ang II的促心肌細(xì)胞肥大作用，為Prx-1成為防治心肌肥大的新靶點(diǎn)提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　一、觀察腦鈉素（brain natriureticpeptide，BNP）、ROS及prx-1在Ang II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大中的表達(dá)。體外培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞(H9C2)，并隨機(jī)分為對照組和Ang II組。在Ang II刺激3h、6 h、12 h、24 h、48h和72h用Real time PCR法

3、進(jìn)行檢測BNP mRNA表達(dá)；在Ang II刺激10min、20min、30min、1h、2h和4h用二氯熒光素二乙酸(DCFH-DA)檢測ROS水平；在Ang II刺激30 min、1 h、2h、4h和8h用western blot法檢測Prx-1蛋白表達(dá)。
　　二、利用Prx-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞使心肌細(xì)胞高表達(dá)Prx-1蛋白，并觀察高表達(dá)Prx-1對Ang II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大、ROS和Akt通路激活p-Aktser47

4、3影響。體外培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞(H9C2)隨機(jī)分為對照組、Ang II組、Ang II+轉(zhuǎn)染對照組和Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將Prx-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞。Ang II組、Ang II+轉(zhuǎn)染對照組和Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組經(jīng)Ang II刺激2h，四組細(xì)胞用western blot法檢測Prx-1蛋白表達(dá)；Ang II組、Ang II+轉(zhuǎn)染對照組和Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組經(jīng)Ang II刺激24 h，四組

5、細(xì)胞用Real-time PCR法檢測BNP mRNA表達(dá)；Ang II組、Ang II+轉(zhuǎn)染對照組和Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組經(jīng)Ang II刺激20 min，四組細(xì)胞用DCFH-DA法檢測ROS水平；Ang II組、Ang II+轉(zhuǎn)染對照組和Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組經(jīng)Ang II刺激1h，四組細(xì)胞用Western blot法檢測磷酸化Akt(p-Aktser473)蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　一、①與對照組比較，

6、Ang II刺激3h、6 h、12 h、24 h、48h和72h的BNP mRNA分別增長1.04±0.04倍、1.06±0.05倍、1.22±0.17倍、1.68±0.33倍、2.12±0.45和2.86±0.52倍，除Ang II刺激3h、6 h和12h外，其它刺激時(shí)間點(diǎn)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　?、趯φ战M的ROS水平為3673±343，Ang II刺激10min、20min、30min、1 h、2h和4h R

7、OS水平分別是4325±136、4742±271、4675±355、4155±364，4047±208和3580±382。與對照組比較，Ang II刺激10min、20min和30min時(shí)ROS水平的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　?、蹖φ战MPrx-1蛋白的表達(dá)值為0.18±0.05，Ang II刺激30 min、1h、2h、4h和8h時(shí)Prx-1蛋白的表達(dá)值是0.30±0.07、0.41±0.12、0.49±0.09、0.

8、38±0.05和0.33±0.07，與對照組比較，各刺激時(shí)間點(diǎn)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　二、①Prx-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞后心肌細(xì)胞Prx-1蛋白表達(dá)：對照組Prx-1蛋白表達(dá)值為0.27±0.03，轉(zhuǎn)染對照組Prx-1蛋白表達(dá)值為0.30±0.05，兩者的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與轉(zhuǎn)染對照組比較，Prx-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組Prx-1蛋白表達(dá)值為0.80±0.15，差異有顯著性(P<0.05)。
　?、?/p>

9、BNP mRNA表達(dá)：與對照組比較，Ang II組，Ang II+轉(zhuǎn)染對照組和Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組BNP mRNA表達(dá)分別增高了1.70±0.25倍、1.83±0.28倍和1.35±0.24倍。與對照組比較，Ang II組BNP mRNA明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；與Ang II組比較，Ang II+轉(zhuǎn)染對照組的表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)，但Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組的表達(dá)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

10、義(p<0.05)。
　?、跼OS水平：對照組ROS的熒光強(qiáng)度為3648±302，Ang II組熒光強(qiáng)度為4688±284，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。與Ang II組比較，Ang II+轉(zhuǎn)染對照組熒光強(qiáng)度是4576±343，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，但Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組熒光強(qiáng)度是3824±255，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　④Prx-1蛋白表達(dá)：對照組Prx-1蛋白的表達(dá)值為0.25±

11、0.03，Ang II組Prx-1蛋白的表達(dá)值是0.70±0.11，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。與Ang II組比較，Ang II+轉(zhuǎn)染對照組Prx-1蛋白的表達(dá)值是0.77±0.18,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，但Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組的Prx-1蛋白的表達(dá)值是1.56±0.24，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　?、萘姿峄疉kt水平：磷酸化Akt的表達(dá)水平以p-Akt和Akt的比值表示。對照組p-Akt

12、 ser473蛋白的表達(dá)值為0.33±0.05，Ang II組p-Aktser473蛋白的表達(dá)值是0.92±0.15差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。與Ang II組比較，Ang II+轉(zhuǎn)染對照組p-Aktser473蛋白的表達(dá)值是0.86±0.18,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，但Ang II+Prx-1轉(zhuǎn)染組的p-Aktser473蛋白的表達(dá)值是0.56±0.12，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　

13、1、Prx-1蛋白在Ang II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大中的表達(dá)顯著增加；ROS和p-Akt ser473在其中的表達(dá)也明顯增加。
　　2、Prx-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞使Prx-1高表達(dá)；高表達(dá)Prx-1可以明顯抑制心肌肥大，并明顯下調(diào)ROS和p-Akt ser473的表達(dá)；
　　3、Ang II可能通過ROS/Akt途徑誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大；并且Prx-1可能通過降低ROS來抑制Akt通路的激活，從而抑制Ang II誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞