西瓜花葉病毒2號(hào)基因組序列測(cè)定及HC-Pro基因的原核表達(dá).pdf

1、　　瓜類(lèi)病毒病害是葫蘆科作物上的一類(lèi)主要病害，病毒種類(lèi)達(dá)30多種，其中以西瓜花葉病毒2號(hào)的危害最大。WMV-2發(fā)生普遍，并廣泛分布于世界各地，通常造成葫蘆科作物的大面積減產(chǎn)和品質(zhì)的下降。本文對(duì)我國(guó)的WMV-2基因組分析研究結(jié)果如下：　　以從病葉中提取WMV-2的總RNA為模板進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA(cDNA)，設(shè)計(jì)合成9對(duì)引物，用PCR方法擴(kuò)增出WMV-2全基因組，經(jīng)序列分析結(jié)果表明WMV-2全基因組序列由9657個(gè)核苷酸組成。該基

2、因組有10個(gè)功能基因，包括843bp的外殼蛋白(CP)基因、1551bp的核包含體b蛋白(NIb)基因、729bp的核包含體a病毒結(jié)合蛋白(NIa-VPg)基因、550bp的核包含體a蛋白(NIa-Pro)基因、159bp的6K2基因，1902bp的柱狀內(nèi)含體蛋白(CI)基因、156bp的6K1基因、1041bp的P3基因、1371bp的輔助成份蛋白(HC-Pro)基因和1329bp的P1基因?！　〗?jīng)DNASTAR軟件分析比較，結(jié)果顯

3、示W(wǎng)MV-2具有與馬鈴薯Y病毒屬成員的基因組一致的結(jié)構(gòu)特征，具有單一的開(kāi)放讀碼框，編碼一個(gè)由3217個(gè)氨基酸組成的多聚蛋白，相對(duì)分子量為365.8kDa?！　⑽覈?guó)WMV-2基因組全序列與法國(guó)株系(WMV-Fr)比較，結(jié)果表明該病毒與WMV-Fr核苷酸序列和氨基酸序列同源性分別為92.4﹪和96.4﹪，各編碼蛋白區(qū)域核苷酸和氨基酸同源性分別為：P1蛋白分別為91.2﹪和90.1﹪，HC-Pro蛋白分別為94.7﹪和97.4﹪，P3蛋白

4、分別為95.34﹪和97.1﹪，CI蛋白分別為90.5﹪和95.9﹪，NIa-Vpg蛋白分別為87.5﹪和94.7﹪，NIa-Pro蛋白分別為89.7﹪和97.9﹪，NIb蛋白分別為92.8﹪和96.5﹪，CP蛋白分別為95.0﹪和98.6﹪。與馬鈴薯Y病毒屬其他成員的全序列進(jìn)行比較分析，與大豆花葉病毒核苷酸和氨基酸同源性最高，分別為75.1﹪和86.0﹪?！　?duì)WMV-2的HC-Pro基因構(gòu)建了原核表達(dá)載體pETWHC，并進(jìn)行了原核