從山羊草中分離小麥籽粒硬度主效基因突變體的研究.pdf

1、小麥硬度主要由小麥硬度主效基因Puroindoline A (PinA) 和Puroindoline B (PinB) 決定，兩者中任一基因發(fā)生突變或缺失均會(huì)對(duì)籽粒硬度造成不同的影響。山羊草屬是與小麥屬遺傳關(guān)系最近的小麥野生近緣植物，也是小麥品種改良的重要基因源。為了豐富小麥類作物籽粒硬度基因庫，為我國(guó)的小麥品質(zhì)改良工作奠定基礎(chǔ)，本研究對(duì)成熟種子中Puroindolines蛋白的分析方法及山羊草中PinA的同源基因進(jìn)行了分離和分析，主要

2、研究?jī)?nèi)容和方法如下： （1）Puroindoline蛋白電泳分析系統(tǒng)的建立和優(yōu)化：從二倍體、六倍體小麥材料及小麥近緣種粗山羊草成熟種子中提取Puroindoline蛋白，通過實(shí)驗(yàn)對(duì)Puroindoline蛋白SDS-PAGE電泳及染色條件進(jìn)行了優(yōu)化和討論，建立了濃縮膠T（凝膠濃度）為4，C（交聯(lián)度）為2.6，電泳電壓為128V；分離膠T為13.5，C為2.6，電泳電壓240V，分離膠電泳時(shí)間1.5h的電泳結(jié)果穩(wěn)定且重復(fù)性好的優(yōu)化

3、的SDS凝膠電泳條件。同時(shí)還引進(jìn)了電泳條帶分析效果更為清晰的尿素凝膠電泳，并對(duì)考馬斯亮藍(lán)染色（藍(lán)染）和硝酸銀染色（銀染）兩種染色方法的染色濃度范圍和染色效果做了比較，并獲得了良好的實(shí)驗(yàn)效果，為小麥中Puroindoline基因的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。 （2）山羊草中PinA基因突變體的篩選：根據(jù)已報(bào)道的PinADNA序列，設(shè)計(jì)了PinA的簡(jiǎn)并引物，以山羊草屬（Aegilops）四個(gè)組34份材料中的基因組DNA為模板，在優(yōu)化的PC

4、R體系下進(jìn)行擴(kuò)增，并對(duì)分離出的25個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，用DNAstar軟件與GenBank中的序列做比對(duì)，結(jié)果表明，7個(gè)測(cè)序序列與GenBank已有序列完全相同，但材料來源不同；14個(gè)序列確定為PinA的新型突變體，它們之間同源性為97.8﹪到100﹪，序列全長(zhǎng)均為447bp，除RM0070和RM0072兩種材料的PinA由于點(diǎn)突變使色氨酸結(jié)構(gòu)域(WWKWWK)中的第二個(gè)W突變?yōu)榻K止子，及RM0032和RM0051材料中PinA所產(chǎn)生的