小麥Puroindoline蛋白的提取與puroindoline a基因人工突變體構(gòu)建.pdf

1、puroindoline 基因(pin)位于小麥5D染色體短臂上的Hardness (Ha)位點(diǎn)，它包括puroindoline a基因(pina)和puroindoline b基因(pinb)，它們共同控制著小麥籽粒硬度。這兩個(gè)基因分別編碼Puroindoline A (PinA)和Puroindoline B (PinB)兩種蛋白，它們位于淀粉粒和蛋白基質(zhì)表面，是小麥籽粒硬度的生化標(biāo)記。PinA蛋白和PinB都有一個(gè)富含色氨酸的結(jié)構(gòu)

2、域，它是Pin的主要功能基團(tuán)，這個(gè)富含色氨酸的結(jié)構(gòu)域除了影響籽粒硬度外，還具有較強(qiáng)的抗菌活性，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌/陰性菌和真菌都有較強(qiáng)的抗菌作用。 為了研究Pin蛋白的這些功能，本論文從蛋白質(zhì)水平和分子水平出發(fā)，分別用生化的手段和分子生物的方法，對(duì)Pin蛋白展開(kāi)研究。在蛋白質(zhì)水平上，我們用含4％Triton X-114/pH 7.8的100mM Tris-HCl緩沖液從市售的蛋糕面粉中提取Puroindoline蛋白，蛋白質(zhì)混合溶液

3、分別用分子篩葡聚糖G-75純化和離子交換柱羧甲基纖維素 (CM-23)進(jìn)行分離和純化，得到了Pin蛋白。在分子水平的研究中，我們選取pina基因作為研究對(duì)象，用分子生物學(xué)的手段和亞克隆的方法，旨在構(gòu)建具有更強(qiáng)抗菌活性的pina人工突變體。 本文成功提取和純化了野生Pin蛋白，在提取過(guò)程中，摸索了提取過(guò)程中蛋白質(zhì)分離純化的條件，豐富了提取過(guò)程中的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，提高了實(shí)驗(yàn)的成功率，另外，在構(gòu)建突變體方面，針對(duì)pina基因的色氨酸功能結(jié)構(gòu)