轉(zhuǎn)基因再生植株后代細(xì)胞質(zhì)雄性不育新材料的發(fā)現(xiàn)及其初步遺傳分析.pdf

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文轉(zhuǎn)基因再生植株后代細(xì)胞質(zhì)雄性不育新材料的發(fā)現(xiàn)及其初步遺傳分析指導(dǎo)老師學(xué)科專業(yè)研究方向徐小遜2005年5月摘要本文以農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將Bt基因?qū)胧荏w自交系18(紅)所獲得的轉(zhuǎn)基因再生植株作為主要研究材料。一方面，檢測外源基因是否在轉(zhuǎn)基因再生植株中繼續(xù)遺傳；另一方面，在T。代再生植株中發(fā)現(xiàn)大量表型變異(不育變異和農(nóng)藝性狀變異)并分析了轉(zhuǎn)基因分離株系與對照自交系7個農(nóng)藝性狀的差異。對出現(xiàn)的不育株，通過用受體自交系保種獲得

2、兩個完全不育穗行。于不同年份不同地點種植兩個不育穗行及用18(紅)回交轉(zhuǎn)育的各世代進(jìn)行觀察，鑒定不育性狀的穩(wěn)定性。同時將完全不育穗行與生產(chǎn)上常年使用的幾個自交系進(jìn)行測交，對不育性狀的遺傳、分類進(jìn)行了初步分析。本研究得到如下主要結(jié)果：1、分子檢測證實T。代再生植株各株系中，外源基因發(fā)生了分離。各株系陽性植株比例均低于3：l，不符合孟德爾遺傳規(guī)律。2、各轉(zhuǎn)基因再生植株株系中均出現(xiàn)大量不育株，通過與未轉(zhuǎn)化對照自交系及用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化后外源基因沒有

3、整合入受體基因組的陰性植株后代的比較，證明再生植株后代中出現(xiàn)的不育變異與轉(zhuǎn)化前的組織培養(yǎng)過程有關(guān)，屬于體細(xì)胞克隆變異。3、對轉(zhuǎn)基因分離株系、陰性植株自交后代和對照自交系7個農(nóng)藝性狀進(jìn)行了田間調(diào)查與統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示：再生植株中株高、穗位高、穗長、穗行數(shù)、行粒數(shù)、穗粒數(shù)、結(jié)實率等7個農(nóng)藝性狀的變異受外源基因插入的影響較小，變異的形成與組織培養(yǎng)過程直接有關(guān)。4、對出現(xiàn)的不育株采用同行可育株授粉及用受體白交系保種，通過幾個世代的觀察，證明該不

4、育變異可以穩(wěn)定遺傳。對完全不育穗行用正常散粉系測交后，找到了相應(yīng)的保持系和恢復(fù)系，證明該不育變異屬丁細(xì)胞質(zhì)核互作雄性不育。5、對兩個完全不育穗行用相應(yīng)保持的白交系回交轉(zhuǎn)育，并于四川和云南兩地進(jìn)行了兩年的育性穩(wěn)定性觀察。結(jié)果表明：兩個不育穗行及回交世代在四川受氣候條件的影響，一些不育株出現(xiàn)了育性的部分恢復(fù)，而在云南各世代不育性表現(xiàn)非常穩(wěn)定。預(yù)示該不育材料具有潛在的生產(chǎn)應(yīng)用價值。6、兩個完全不育穗行與育性恢復(fù)專效性測驗系恢313、自風(fēng)1測交