棉花細胞質雄性不育恢復基因候選區(qū)域基因SSCP標記開發(fā)與分析.pdf

1、棉花三系雜交制種技術不僅成本低廉、簡便高效，而且能夠顯著提高棉花產(chǎn)量。棉花恢復基因定位與分析對于研究恢復基因作用機制和改良恢復系具有重要意義。本研究以哈克尼西棉細胞質雄性不育系和恢復系為親本，構建F2群體，通過調查F2群體單株的花粉育性，確認恢復基因的遺傳模式;對課題前期初步定位的13個SSR標記進行D基因組本地Blast分析，然后對候選區(qū)域內存在的PPR基因及其它基因在NCBI網(wǎng)站Blast分析推測其同源基因;采用SSCP標記技術結合

2、群體分離分析法(BSA)，篩選與恢復基因連鎖的分子標記，并對其進行群體基因型分析，構建遺傳連鎖圖譜;同時，對目標區(qū)域內17個候選基因在三系花蕾發(fā)育四個時期的表達模式進行熒光定量PCR分析，明確這些基因在三系材料中的表達模式。取得的主要實驗結果如下:
　　1、通過對初步定位的13個SSR標記經(jīng)過D基因組本地Blast分析，發(fā)現(xiàn)13個標記分布在9個不同的Scaffolds上，在包含最近的標記BNL3535的160kb范圍內，發(fā)現(xiàn)有9個

3、PPR基因和9個非PPR間隔基因成簇存在，其中標記BNL3535位于2個PPR基因Cotton_D_gene_10013437和Cotton_D_gene_10013446之間，對應的物理距離分別為40.89kb和53.66kb。
　　2、分段設計出覆蓋這18個基因序列的引物共155對，再利用SSCP技術結合群體分離分析法(BSA)篩選到15對SSCP多態(tài)性引物，然后結合前期的3個緊密連鎖的SSR標記，對這18個標記在F2群體中進

4、行基因型分析，結果表明這些標記定位在距離恢復基因4.8cM范圍內。其中BNL3535是距離最近的標記，遺傳距離為2.9 cM，343401-1和344805-2是距離恢復基因最近的SSCP標記，遺傳距離均為3.2 cM。
　　3、對目標區(qū)域內的17個基因在三系花蕾發(fā)育四個時期的表達模式進行分析，結果表明，這9個PPR基因的在三系花蕾發(fā)育前期(1-2 mm)表達差異不明顯，在進入3mm以后時期的表達模式產(chǎn)生明顯差異;而大部分非PPR