大白菜細胞質(zhì)雄性不育育性恢復基因的分子標記.pdf

1、本研究以西北農(nóng)林科技大學園藝學院白菜組育成的大白菜細胞質(zhì)雄性不育系02A<,1>與恢復材料02S<,149-5>配制的可育F<,1>、F<,2>分離群體為材料，采用分離群體分組分析法(BSA)，進行了大白菜細胞質(zhì)雄性不育育性恢復基因分子標記的篩選及連鎖分析。同時，對SRAP(Sequence-related amplified polymorphism，序列相關擴增多態(tài)性)技術在大白菜分子育種中的應用做了探索。主要結(jié)果如下： 1

2、.以大白菜可育分離F<,2>群體為材料，通過花期育性分離分析，證實大白菜恢復材料02S<,149-5>對大白菜pol細胞質(zhì)雄性不育系02A1育性的恢復為一對顯性基因控制。 2.利用F<,2>群體構(gòu)建的可育DNA混合池和不育DNA混合池篩選了400個10堿基引物，在兩DNA混合池之間有差異條帶的引物用構(gòu)建混合池的單株驗證，發(fā)現(xiàn)引物S<,1036>(AAGGCACGAG)擴增的分子量為657bp的條帶為大白菜可育株特異標記，在不育單

3、株中未擴增出。重復性好。進一步用引物S<,1036>對F<,2>群體進行擴增，連鎖分析，S<,1036-657>與育性恢復基因的遺傳距離為8.5cM。 3．回收并對特異片段S<,1036-657，克隆、測序。根據(jù)測得序列，在NCBI上進行BLASTn比對，發(fā)現(xiàn)與編碼擬南芥和油菜的MYB DNA結(jié)合蛋白的核酸序列的同源性達87％。 4．以大白菜基因組DNA為模板，通過正交試驗設計，從Mg<'2+>、Taq酶、dNTP<,s

4、>、引物、模板5種因素4個水平對大白菜SRAP反應體系進行優(yōu)化，建立了適合于大白菜的SRAP-PCR優(yōu)化反應體系，反應體積為251μl，Mg<'2+>濃度為3.0mmol/L，dNTP<,s>為0.2mmol/L，Taq酶1.5u，引物為0.21unol/L，模板DNA73.2ng。PCR反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性1min，35℃復性1min，72℃延伸1min，5循環(huán)；94℃變性1min，50℃復性lmin，72℃延