14828.兩株海洋來源鏈霉菌的分類鑒定及其活性次級代謝產(chǎn)物的研究

1、博士學位論文兩株海洋來源鏈霉菌的分類鑒定及其活性次級代謝產(chǎn)物的研究—弋●●J●一●l●11LnaraCterlZatlon0ltwomarine—derivedStreDtomVCeteSann1‘l‘■‘1■’‘studiesOntlleirbioactivesecondarVmetabolites學號：10807030完成日期：2013年9月大連理工大學DaliaJlUniversityofTechnology大連理工大學博士學位論

2、文摘要海洋鏈霉菌是多種新穎天然產(chǎn)物的重要來源。對海洋鏈霉菌進行分離、鑒定及其活性次級代謝產(chǎn)物分離純化、結構解析，有助于深入挖掘其獨特的基因資源和生物合成潛能，為開發(fā)在醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)等領域迫切需要的藥物和先導化合物奠定基礎。微生物影像質譜是近幾年來發(fā)展起來的研究微生物與環(huán)境、微生物細胞間次級代謝產(chǎn)物相互作用而產(chǎn)生的新技術，目前國內相關的研究還較少。本課題組在大連周邊海域沉積物樣品中分離了幾百株海洋放線菌，但對其分類鑒定和活性化合物的研究還沒有

3、深入進行。本研究針對其中的兩株放線菌S187和M10，分別從菌株的分類鑒定、活性次級代謝產(chǎn)物的分離純化和結構解析、發(fā)酵條件的優(yōu)化等幾個方面進行了研究，并利用影像質譜和基因組挖掘對兩株放線菌產(chǎn)生的活性次級代謝產(chǎn)物進行了分析預測，所取得的研究結果如下：1多相分類法鑒定菌株S187通過形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、細胞化學組分、16SrRNA序列分析及基因組DNADNA隨機雜交對菌株S187進行分類鑒定。菌株S187與其近緣菌株Streptomyces

4、∥avofuscusNRRLB80361和SalbiaxialisDSM在培養(yǎng)特征、生理生化特征等均呈現(xiàn)明顯差異。DNADNA雜交試驗表明，菌株S187同S加vD舳c娜和Salbiaxialis的相關性僅為314％和469％，因此，鑒定s187為鏈霉菌屬的新種，命名為星海鏈霉菌(Sxinghaiens&spnov)。星海鏈霉菌對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和銅綠假單胞菌等細菌測試菌具有良好的拮抗活性，具有潛在的開發(fā)前景。2星海

5、鏈霉菌活性次級代謝產(chǎn)物研究對星海鏈霉菌在三種不同固體培養(yǎng)基TSB、A1和Marineagar上的純培養(yǎng)和瓊脂塊法抗菌活性測試影像質譜分析，結果表明，星海鏈霉菌的次級代謝物中沒有有效的質譜信號與抑菌圈完全吻合。以金黃色葡萄球菌為指示菌，通過乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析、C18快速分離柱和半制備HPLC從25L星海鏈霉菌發(fā)酵液中分離得到兩個化合物xinghaiamineA和B。運用質譜、紅外光譜、紫外光譜和核磁共振(1H—NMR，13C—NMR

6、1HHcosy，HSQC，HMBC，DEPT135)等光譜方法對兩個化合物進行表征，結構解析確定xinghaiamineA為一種含亞砜官能團的生物堿，文獻檢索確定其為一種新結構化合物且其特征的亞砜結構系首次從微生物中分離得到?？咕钚詼y試表明，xinghaiamineA和B具有廣譜抗細菌活性，且對耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)具有較強的抑制作用，但對真菌沒有抑制作用。細胞毒活性表明，xinghaiamineA對四株人類腫瘤細胞均有一定的