24778.myox與ncadherin相互作用影響促性腺激素釋放激素神經(jīng)元的遷移

1、學(xué)校代碼：巡分類號：盟研究生學(xué)號：10200200821536密級：玉東牡知予冠大雪碩士學(xué)位論文MyoX與N—Cadherin相互作用影響促性腺激素釋放激素神經(jīng)元的遷移GnRHmigrationisinfluencedbytheinteractionofMyoXandNCadherin作者：苑琳指導(dǎo)教師：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)位類型：朱筱娟教授遺傳學(xué)神經(jīng)細(xì)胞遷移學(xué)歷碩士東北師范大學(xué)學(xué)位評定委員會2011年6月摘要促性腺激素釋放性激素(G

2、onadotropinreleasing—hormone，GnRH)神經(jīng)細(xì)胞起源于鼻間隔嗅基板區(qū)域，沿著犁鼻神經(jīng)纖維遷移到篩板，然后穿過篩板繞過嗅球，最終遷移至前腦部位分泌GnRH激素。這種激素是生殖軸重要的腦部調(diào)節(jié)因子，在調(diào)節(jié)垂體。|生腺軸的功能中發(fā)揮著很關(guān)鍵的作用。因此GnRH神經(jīng)細(xì)胞遷移至正確位置，對脊椎動物生殖系統(tǒng)的發(fā)育及生殖功能的發(fā)揮非常重要。MyoX(MyosinX)分子作為一種非傳統(tǒng)形式的肌球蛋白，在絲足形成、細(xì)胞遷移、細(xì)

3、胞粘附及極性建立等過程中都發(fā)揮著重要作用。實(shí)驗(yàn)室前期工作已經(jīng)證明沉默MyoX的表達(dá)會引起細(xì)胞極性的喪失。已有研究表明MyoX通過FERM結(jié)構(gòu)域與血管內(nèi)皮細(xì)胞鈣粘附蛋白(VE—Cadherin)相互作用，攜帶VECadherin沿著絲足運(yùn)動，從而促進(jìn)早期細(xì)胞間連接的建立。NCadherin是跨膜糖蛋白的鈣粘素家族的重要成員之一，與VE—Cadherin具有高度的同源性。NCadherin是表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)的鈣粘附蛋白，推測NCadherin

4、可能具有與VE—Cadherin相似的功能，通過與MyoX相互作用，在神經(jīng)細(xì)胞粘附形成和極性建立中發(fā)揮著重要作用。實(shí)驗(yàn)中通過免疫共沉淀證明MyoX可通過尾部區(qū)與NCadherin相互作用；然后沉默MyoX在NLT細(xì)胞系中的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞粘著斑密度由0097士000021個(gè)／岬：降低密度為0052士000017個(gè)／!arn2；利用‘stickandwash’方法也檢測到細(xì)胞與基質(zhì)問粘附能力降低；同時(shí)Factin的密度也由000434000

5、012個(gè)／，tm2降低為00027士000015個(gè)／um2，說明細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性受到影響；通過RealtimePCR分析發(fā)現(xiàn)，沉默MyoX導(dǎo)致NCadherin的轉(zhuǎn)錄水平下降為正常水平的5240％，Westernblot分析表明蛋白表達(dá)也受到抑制；細(xì)胞團(tuán)分析表明，正常情況下，細(xì)胞團(tuán)周圍細(xì)胞遷移總數(shù)和輻射狀遷移細(xì)胞數(shù)目分別為117土205841個(gè)和115士204134個(gè)，而MyoX沉默后，遷移總數(shù)和輻射狀遷移細(xì)胞分別降為94土136651

6、個(gè)和90士133416個(gè)，NCadherin的過表達(dá)又分別使之提高為1114143858個(gè)和109士145428個(gè)；同時(shí)MyoX也影響細(xì)胞遷移距離，沉默MyoX使細(xì)胞團(tuán)周圍細(xì)胞的平均遷移距離由正常水平的158士15701llxm降低為109士361012肛m，而過表達(dá)NCadherin使細(xì)胞平均遷移距離恢復(fù)為170士103982pm?？傊?，結(jié)果表明MyoX與NCadherin相互作用，調(diào)節(jié)GnRH神經(jīng)細(xì)胞的正確遷移，為進(jìn)一步闡明GnRH