脊尾白蝦繁殖生物學(xué)研究.pdf

1、脊尾白蝦具有繁殖季節(jié)長(zhǎng)、生長(zhǎng)速度快、環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)。近年來隨著海水養(yǎng)殖向低鹽度區(qū)域的發(fā)展，脊尾白蝦的養(yǎng)殖產(chǎn)量也迅速增加，常與其他海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)種類混合養(yǎng)殖。
　　為研究脊尾白蝦在繁殖過程中的調(diào)控機(jī)理，本文首次克隆了FAMeT基因，并測(cè)定了在連續(xù)三次卵巢發(fā)育過程中FAMeT基因在脊尾白蝦中的表達(dá)。同時(shí)對(duì)中國(guó)對(duì)蝦與脊尾白蝦在連續(xù)三次繁殖中卵黃蛋白原基因的表達(dá)情況與卵巢發(fā)育的組織切片進(jìn)行綜合分析，闡述了中國(guó)對(duì)蝦與脊尾白蝦繁殖的區(qū)別。具體研

2、究結(jié)果如下：
　　1.脊尾白蝦FAMeT基因克隆
　　為了研究法尼酸甲基轉(zhuǎn)移酶（FAMeT）在對(duì)脊尾白蝦卵巢發(fā)育中作用，采用反轉(zhuǎn)錄PCR和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（RACE）克隆得到了脊尾白蝦FAMeT的全長(zhǎng)cDNA序列（GenBank登錄號(hào)：AHB23861），它包括一個(gè)76bp的5’非編碼區(qū)（untranslated regions，UTR）、一個(gè)712bp的3’非編碼區(qū)和一個(gè)831bp的開放閱讀框（open readi

3、ng frame，ORF）。編碼276個(gè)氨基酸，3’UTR中具有典型的加尾信號(hào)AATAAA和Poly(A)尾。序列分析發(fā)現(xiàn)該氨基酸序列具有FAMeT的特征序列CF（CPAMD8/FAMeT）區(qū)域，因此可判斷獲得的cDNA序列是脊尾白蝦的FAMeT基因序列。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qRT-PCR）的方法分析了其在不同組織中、不同卵巢發(fā)育階段中的表達(dá)量變化，發(fā)現(xiàn) FAMeT在脊尾白蝦體內(nèi)各個(gè)組織中均有表達(dá)，其中鰓中 FAMeT基因相對(duì)表達(dá)

4、量最高，大顎器次之；其他組織中 FAMeT相對(duì)表達(dá)量較少，與鰓、大顎器中的相對(duì)表達(dá)量有顯著差異。這說明FAMeT可能參與調(diào)控脊尾白蝦的多種生理功能。
　　2.FAMeT基因在脊尾白蝦連續(xù)三次卵巢發(fā)育中的表達(dá)分析
　　為了研究法尼酸甲基轉(zhuǎn)移酶（Farnesoic acid O-methyltransferase，F(xiàn)AMeT）在脊尾白蝦卵巢發(fā)育中的作用，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法分析連續(xù)三次繁殖過程中卵巢不同發(fā)育時(shí)期（I期到V期

5、）大顎器、卵巢和肝胰腺中FAMeT基因的表達(dá)規(guī)律。結(jié)果表明：在卵巢發(fā)育周期內(nèi)，F(xiàn)AMeT基因在大顎器、卵巢、肝胰腺中的表達(dá)量變化趨勢(shì)基本一致，從I期到IV期逐漸下降，到V期時(shí)表達(dá)上調(diào)；在每個(gè)卵巢發(fā)育時(shí)期，F(xiàn)AMeT基因在大顎器中表達(dá)量最高，約為卵巢中表達(dá)量的20-30倍。該結(jié)果表明大顎器是合成FAMeT的主要組織，脊尾白蝦繁殖過程中FAMeT基因主要在卵巢發(fā)育前期表達(dá)，可以導(dǎo)致 MF的大量合成，促進(jìn)卵巢發(fā)育。
　　3.Vg在中國(guó)對(duì)

6、蝦與脊尾白蝦連續(xù)三次卵巢發(fā)育中的表達(dá)分析
　　卵黃蛋白原基因在脊尾白蝦肝胰腺的表達(dá)趨勢(shì)為：在I到IV期逐漸上升，IV期達(dá)到最高值。抱卵后的V期降到最低。結(jié)果顯示，脊尾白蝦卵巢發(fā)育過程中，體內(nèi)卵黃蛋白原表達(dá)總量呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，在排卵后的恢復(fù)期表達(dá)總量下降。通過左圖可以看出，在卵巢發(fā)育的各個(gè)時(shí)期，卵黃蛋白原基因主要在肝胰腺內(nèi)表達(dá)，因此肝胰腺是合成卵黃蛋白原的主要部位。
　　卵黃蛋白原在中國(guó)對(duì)蝦肝胰腺內(nèi)表達(dá)水平為：在卵巢發(fā)育I

7、到IV期，卵黃蛋白原基因表達(dá)量逐漸上升，IV期時(shí)激增到最高值。V期時(shí)下降至最低值，為下一次卵巢發(fā)育的I期。結(jié)果顯示，中國(guó)對(duì)蝦卵巢發(fā)育前4個(gè)時(shí)期，體內(nèi)卵黃蛋白原表達(dá)總量呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，在排卵后的恢復(fù)期表達(dá)總量下降。其中，在I到III期及V期，卵巢貢獻(xiàn)了較多的卵黃蛋白原，只有IV期時(shí)，肝胰腺內(nèi)卵黃蛋白原表達(dá)量驟增，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過卵巢內(nèi)表達(dá)量，成為 IV期卵黃蛋白原合成的主要組織。
　　4.脊尾白蝦與中國(guó)對(duì)蝦卵巢發(fā)育組織學(xué)觀察
　　

8、在卵巢發(fā)育周期中，脊尾白蝦與中國(guó)對(duì)蝦的I期和II期時(shí)，發(fā)育的卵細(xì)胞在占卵巢細(xì)胞數(shù)比例上變化緩慢，而在發(fā)育到III期時(shí)，中國(guó)對(duì)蝦卵巢內(nèi)成熟卵細(xì)胞數(shù)量急劇上升，占到卵巢細(xì)胞總數(shù)的70％左右，IV期達(dá)到最高，約為90%。相對(duì)地，脊尾白蝦卵巢在II期到IV期的發(fā)育過程中，成熟卵細(xì)胞數(shù)量增速比較穩(wěn)定，III期時(shí)，成熟卵細(xì)胞僅占50%，IV期時(shí)迅速增至90%。對(duì)比在卵巢發(fā)育過程中，脊尾白蝦與中國(guó)對(duì)蝦在卵巢和肝胰腺的卵黃蛋白原表達(dá)總量，得知脊尾白蝦卵