葡萄胎的分子遺傳學分析及基因NLRP7和KHDL3C的致病性研究.pdf

1、學校代碼：10023學號：200601044葡萄胎的分子遺傳學分析及基因NLRP7和K助L3C的致病性研究專業(yè)年級：北京協(xié)和醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)2006級姓名：計鳴良導師：向陽(教授)趙峻(副教授)北京協(xié)和醫(yī)學院臨床學院(北京協(xié)和醫(yī)院)婦產科完成日期：2014年6月摘要背景葡萄胎是一種良性滋養(yǎng)細胞疾病，其特征為絨毛水腫變性和滋養(yǎng)細胞增生。根據其組織病理學表現，葡萄胎包括完全性葡萄胎(completehydatidifommole，Cm訂)

2、和部分性葡萄胎(阿ialhydatidifonllmole，P陽Ⅵ)兩類。C玎vI常為孤雄二倍體(鋤drogeneticCⅡ訂，AnCⅡ訂)，但近來發(fā)現了雙親來源的完全性葡萄胎(bip猢1talC玎Ⅵ，BiC刪)，這種特殊類型多見于家族性復發(fā)性葡萄胎(觚iIialrecurrenthydatidifommole，FRⅡvI)，偶可見于散發(fā)的復發(fā)性葡萄胎(rec哪nthydatidi南冊mole，I瑚M)。FIⅢM是一種罕見的疾病，可能為

3、常染色體隱性遺傳病，患者多有印記基因異常，并有NLRP7和K玎DC3L不同位點的純合突變。目的本研究擬通過短串聯重復序列(shortt鋤demrepeat，STR)多態(tài)性檢測對FR皿Ⅵ、R州和散發(fā)性葡萄胎及其雙親進行遺傳學分析，確定葡萄胎的遺傳學起源，研究FIⅢM是否與BiC叮訂存在相關性。并對BiC玎Ⅵ患者的NLRP7和KHDC3L基因編碼序列進行測序，以AnC玎訂患者為對照，尋找上述基因編碼序列的變異位點，并結合數據庫檢索的一般人群

4、資料，探討所發(fā)現位點的致病性。材料收集1個F刪家系、5個IⅢM家系和6個散發(fā)性葡萄胎病例的臨床資料，并收集葡萄胎組織新鮮清宮標本或蠟塊標本及其切片，采集患者及其丈夫和母親、姐妹的外周血。分別提取葡萄胎組織和外周血DNA。方法一、復核葡萄胎病理標本HE染色和p57唧免疫組化染色切片，再次明確葡萄胎診斷，并區(qū)分CHM和PHM。二、選取人不同染色體上用于多態(tài)性檢測的STR位點，使用帶有熒光標記的標準引物分別對上述DNA進行PCR擴增。使用聚丙

5、烯氨酰胺凝膠電泳或DNA測序儀對擴增產物進行長度片段檢測，并按葡萄胎及其雙親為單位進行分組分析，從而確定葡萄胎的遺傳學起源。三、根據基因NLI沖7和K玎DC3L的編碼區(qū)參考序列，分別設計引物擴增葡萄胎患者及其母親或姐妹這兩個基因的所有外顯子，并使用DNA測序儀對擴增產物進行測序。將測序結果與參考序列進行比較，找出可改變表達產物氨基酸序列的突變或非同義異形體(nonsynonymousvariant，NSV)。在dbSNP和emsembl