水牛胎兒成纖維細胞系的建立及其生物學(xué)特性的研究.pdf

1、水牛是中國南方地區(qū)較為重要的一種家養(yǎng)動物，在農(nóng)業(yè)耕作上一直將其作為勞力使用。近些年來隨著對水牛研究的不斷深入，其經(jīng)濟利用價值逐漸顯現(xiàn)出來，特別是將其作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)目的蛋白。目前尚未建立生物學(xué)特性明確的水牛細胞系，限制了在細胞水平研究和長期保存水牛種質(zhì)資源，也妨礙了通過將穩(wěn)定表達外源基因的細胞作為核移植供體，獲得基因改造水牛的研究。因此，建立水牛細胞系并對其進行生物學(xué)特性的研究非常重要。
　　 從南寧市內(nèi)屠宰場獲取88只水牛胎

2、兒，對其耳緣、腎臟、皮膚進行原代培養(yǎng)，從分離獲得的成纖維細胞中挑選出形態(tài)正常、生長動力學(xué)較好的細胞系，最后挑選出2個水牛胎兒皮膚成纖維細胞系(BFSF101107、BFSF101007)、1個水牛胎兒耳緣成纖維細胞系(BFEF)、1個水牛胎兒腎臟成纖維細胞系(BFKF)、1個水牛胎兒腎臟扁平狀成纖維細胞系(BFKF-Flat)。然后對這些細胞系分別進行生長動力學(xué)測定、凍存前/復(fù)蘇后活率測定、微生物污染檢測、核型分析、同工酶檢測、熒光蛋白

3、轉(zhuǎn)染效率、細胞周期分析。這5個細胞系生長動力學(xué)測定結(jié)果所繪制的生長曲線都為“S”型；細胞凍存前、復(fù)蘇后都具有較高的活率；微生物污染檢測的結(jié)果均為陰性。對這些細胞系進行核型分析和同工酶分析檢測是否存在細胞交叉污染，結(jié)果顯示這些細胞絕大多數(shù)含有48條染色體(20代)，同工酶電泳圖譜顯示細胞系之間沒有交叉污染。相同轉(zhuǎn)染條件下，在綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白的表達效率上BFSF101107的最高，在表達強度上BFKF-Flat的最強。接著，對各細

4、胞系第20代細胞進行細胞周期分析，結(jié)果BFSF101107與他細胞系相比，細胞之間染色體均一性好、畸變概率低。因此，基于細胞的后續(xù)研究可以依據(jù)這些細胞系的不同生物學(xué)特性進行相應(yīng)的選擇。
　　 在無抗生素條件下，成功建立了2個水牛胎兒皮膚成纖維細胞系(BFSF101107、BFSF101007)、1個水牛胎兒耳緣成纖維細胞系(BFEF)、1個水牛胎兒腎臟成纖維細胞系(BFKF)、1個水牛胎兒腎臟扁平狀成纖維細胞系(BFKF-Fla