伏馬毒素B1免疫學檢測方法的研究.pdf

1、伏馬毒素(Fumonisins)是一種主要由串珠鐮刀菌(Fusarium moniliforme)產生的具有毒性及致癌性的真菌毒素,通常存在于受此類真菌污染的玉米等糧食作物及其相關的食品和動物飼料中。該毒素能夠引起人畜多種疾病,嚴重威脅人類及動物的健康,因而越來越引起人們的關注。伏馬毒素有多種結構類似物,其中伏馬毒素B1(Fumonisin B1,FB1)是污染糧食作物的主要成分,也是引發(fā)毒性的主要原因。本研究在制備完全抗原及抗FB1多

2、克隆抗體的基礎上,建立了針對FB1的間接競爭ELISA、化學發(fā)光ELISA及免疫膠體金快速檢測方法。由于FB1是一種不具備免疫原性的半抗原小分子,必須通過與載體蛋白的偶聯獲得免疫原性。首先以戊二醛法將半抗原FB1與載體蛋白鑰孔血藍蛋白(KLH)偶聯成為完全抗原KLH-FB1,KLH-FB1作為免疫原免疫新西蘭大白兔制備抗血清；以戊二醛法將半抗原FB1與另一種載體蛋白卵清白蛋白(OVA)偶聯成為完全抗原OVA-FB1,OVA-FB1作為包

3、被原進行血清效價檢測及后續(xù)ELISA實驗。間接ELISA檢測血清效價,效價可達1：9600。用辛酸-硫酸銨法、Protein G親和層析法分別純化制備的多克隆抗體,結果表明Protein G親和層析法純化的多抗較純,抗體活性也較好。利用制得的抗FB1多克隆抗體,分別建立了間接競爭ELISA檢測方法與化學發(fā)光ELISA檢測方法。其中,間接競爭ELISA檢測在37℃包被4h,包被抗原0.5μg/mL,一抗稀釋度1：4000,二抗稀釋度1：6

4、000的條件下,檢測靈敏度為0.41ng/mL,檢測線性范圍為0.41-33.3ng/mL,與黃曲霉毒素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮等常發(fā)真菌毒素無交叉反應。化學發(fā)光ELISA檢測在包被抗原0.5μg/mL,一抗稀釋度1：5000,二抗稀釋度1：40000的條件下,檢測靈敏度為0.14ng/mL,檢測線性范圍為0.14-33.3ng/mL。利用兩種檢測方法同試劑盒檢測同時應用于樣品的加標回收實驗,檢測樣品回收率在各自線性范圍內達到80%以上