雞球蟲多價卵黃抗體IgY的制備及其抗球蟲效果評價.pdf

1、雞球蟲病(Coccidiosis)主要由艾美耳屬(Eimeria)的腸道原生寄生蟲引起,是目前嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的寄生蟲疾病之一。我國作為一個養(yǎng)雞大國,雞球蟲病嚴(yán)重制約了我國養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展。雞球蟲病防治一直以藥物為主,但藥物的長期廣泛使用,出現(xiàn)了耐藥蟲株和食品中抗球蟲藥物殘留等問題,危害到人們的身體健康,而昂貴的新藥開發(fā)費用和嚴(yán)格的藥物殘留標(biāo)準(zhǔn)等原因,使抗球蟲藥的研制和使用受到了極大的限制。很多學(xué)者試圖從免疫的角度來預(yù)防該病,如使用活疫苗、強

2、毒活疫苗等,但疫苗的使用會出現(xiàn)毒力返強和容易致病等問題,因此急需開發(fā)無藥物殘留且安全可靠的綠色抗球蟲產(chǎn)品。近年來,隨著特異性卵黃抗體在動物疾病方面的成功應(yīng)用,通過抗球蟲的卵黃抗體防治球蟲病成為球蟲病防控的新途徑,本文利用球蟲活卵囊免疫產(chǎn)蛋母雞,將制備的抗球蟲卵黃抗體作為飼料添加劑飼喂雛雞,使雛雞產(chǎn)生一定程度的被動免疫保護,為進一步在臨床上利用卵黃抗體防治雞球蟲病奠定了基礎(chǔ)。
　　 1、抗雞球蟲多價卵黃抗體IgY的制備與鑒定

3、>　　 將擴增純化的柔嫩、巨型、早熟艾美耳球蟲活卵囊按照一定的比例混合為免疫原,對60日齡蛋雞進行口服免疫,共免疫六次。每次免疫前采集雞外周血液分離血清,產(chǎn)蛋后每隔一段時間取蛋分離卵黃抗體,用建立的間接ELISA方法進行血清和雞蛋抗體水平的動態(tài)監(jiān)測。對飽和硫酸銨法提取IgY的最適水稀釋倍數(shù)和最適pH值進行了優(yōu)化,建立了雞蛋中IgY的提取及純化方法。通過SDS-PAGE電泳法對提純的抗球蟲IgY進行純度測定,通過ELISA方法對IgY的

4、理化穩(wěn)定性進行檢測。結(jié)果表明,卵囊首免后雞血清中球蟲抗體逐漸上升,二免后15d血清抗體達到較高水平,五免后出現(xiàn)短暫時間內(nèi)的小幅度下降,六免后15d達到峰值。蛋中抗體五免時已經(jīng)處于較高水平,六免加強免疫后,抗體水平穩(wěn)步上升。采用飽和硫酸銨法提取IgY時卵黃液的最佳稀釋倍數(shù)9倍,最適pa為5.1。SDS-PAGE分析表明,提純的卵黃抗體由70KDa左右的重鏈和40KDa左右的輕鏈組成,純度達98％,效價達1:140000/mg,理化穩(wěn)定性檢

5、測表明提取的卵黃抗體具有良好的熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性。通過提取后冷凍干燥,共計獲得145g的卵黃抗體,為開展實驗室和田間抗球蟲評價奠定了堅實的基礎(chǔ)。
　　 2、雞球蟲多價卵黃抗體IgY抗球蟲效果評價
　　 將已制備的純度及生物學(xué)活性均較好的抗球蟲卵黃抗體凍干粉按照0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.5％、1％的濃度添加到預(yù)混飼料中飼喂1日齡黃羽肉雞,連續(xù)飼喂10d,同時設(shè)立未添加陰性、未添加陽性和鹽霉素防治對

6、照組,每組20只雞。于10日齡時,除未添加陰性對照組外每組每雞經(jīng)嗉囊接種1×104個E.tenella孢子化卵囊,8 d后稱重撲殺,對各組的存活率、相對增重率、病變減少率、相對卵囊產(chǎn)量和抗球蟲指數(shù)(ACI)等指標(biāo)進行統(tǒng)計分析,比較免疫保護效果。結(jié)果表明,綜合各項指標(biāo),1％IgY添加組、0.5％。IgY添加組免疫保護力稍低于藥物對照組,但均顯著好于其他各添加組;飼喂IgY能使雞體產(chǎn)生顯著的被動免疫保護力,雖然用IgY進行抗球蟲免疫預(yù)防要比