水稻黑條矯縮病毒毒質的形成及其生物學功能研究.pdf

1、水稻黑條矮縮病毒(Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV)是斐濟病毒屬的成員，侵染玉米和水稻后給亞洲地區(qū)玉米和水稻生產(chǎn)帶來巨大損失。RBSDV由昆蟲介體灰飛虱傳播，能夠在植物宿主和昆蟲介體中復制。雙層衣殼內包裹著病毒的10條基因組dsRNAs(S1-S10)，編碼至少12個蛋白，其蛋白名稱依照各自對應的基因組片段而命名(P1-P10)。同其它斐濟病毒成員一樣，RBSDV的復制與裝配是在細胞質病毒包涵體

2、結構（通常被稱作毒質）里進行。RBSDV的第9條片段(S9)的第一個閱讀框（ORF）編碼的蛋白P9-1是形成毒質的關鍵蛋白，但是毒質內部其他蛋白或內部成分之間的相互作用我們還知之甚少。將P9-1與綠色熒光蛋白(GFP)融合后，在本氏煙草的表皮細胞中單獨表達，用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)P9-1可以形成包涵體結構。同樣是在本氏煙草的表皮細胞中，運用雙分子熒光互補(BiFC)實驗證明了P9-1具有自我互作的能力。我們通過P9-1的免疫共沉

3、淀(CO-IP)實驗分析表明RBSDV的非結構蛋白P6與P9-1存在互作。通過桿狀病毒在草地夜蛾（spodoptera frugiperda，sf9）細胞表達系統(tǒng)中的雙分子熒光互補實驗，結果顯示P6與9-1互作、P5-1與P6互作。免疫電鏡分析顯示非結構蛋白P5-1、P6和P9-1共定位于高電子密度的包涵體結構，這表明P5-1與P6是毒質的結構成分。在sf9細胞中單獨表達P6時，P6是彌散分布在細胞質的，但是當它與P9-1共表達時，則會