仔豬大腸桿菌F4受體基因的精細(xì)定位.pdf

1、大腸桿菌F4引起的仔豬腹瀉給養(yǎng)豬業(yè)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失，如果能夠找到抗大腸桿菌腹瀉的基因，通過(guò)抗病育種培育出抗大腸桿菌腹瀉的豬群，無(wú)疑將有很重要的意義。大腸桿菌F4粘附于仔豬小腸上皮細(xì)胞是其致腹瀉的前提條件，而F4能否粘附是由仔豬小腸上皮有無(wú)受體決定的，如果仔豬小腸上皮有受體，則F4粘附于小腸上，否則不粘附。只有大腸桿菌F4特異地粘附到小腸上皮后，細(xì)菌才可以抵御腸道蠕動(dòng)及腸液沖刷作用，定居于小腸大量繁殖并分泌毒素，進(jìn)而引起仔豬腹瀉。因此

2、，如果能找到?jīng)Q定受體有無(wú)的基因就可以培育抗腹瀉豬群，而尋找基因的一個(gè)基礎(chǔ)就是精細(xì)定位基因所在的區(qū)段。 為了精細(xì)定位仔豬F4受體基因，本實(shí)驗(yàn)利用了16個(gè)家系440份耳組織樣品和366份小腸樣品。表型數(shù)據(jù)為F4ab、F4ac、F4ad三種菌株與小腸的粘附型數(shù)據(jù)。在前人研究的基礎(chǔ)上，我們?cè)赟0293與SW225之間選擇了10個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，利用熒光引物PCR結(jié)合AB1377測(cè)序儀熒光電泳掃描以及GENESCAN<'TM>3.0和GENO

3、TYPER<'TM>2.5軟件分析技術(shù)判定微衛(wèi)星基因型。利用家系資料對(duì)不符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律的基因型進(jìn)行校正或者剔除，將保留下來(lái)的微衛(wèi)星標(biāo)記基因型用于下一步的分析。由于連鎖緊密時(shí)檢測(cè)出連鎖很困難，但可檢測(cè)出關(guān)聯(lián)，尤其當(dāng)標(biāo)記與疾病基因連鎖非常緊密時(shí)，關(guān)聯(lián)分析的統(tǒng)計(jì)效力遠(yuǎn)高于連鎖分析，因此本實(shí)驗(yàn)利用PDT對(duì)粘附型數(shù)據(jù)和標(biāo)記基因型數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。 通過(guò)粘附實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大白，長(zhǎng)白，松遼黑豬與F4ab，F(xiàn)4ac，F(xiàn)4ad之間粘附情況存在顯著

4、差別(P<0.01)，松遼黑豬以非粘附型為主，很少有強(qiáng)粘附型個(gè)體，3種菌株的非粘附型比例分別為63％，72％，47％，而長(zhǎng)白豬中粘附型和強(qiáng)粘附型比例較高，非粘附型分別只占13％，20％，25％，大白豬介于二者之間，非粘附比例分別為43％，44％，44％。在同一品種豬內(nèi)，3種菌株的粘附比例在松遼黑豬內(nèi)和大白豬內(nèi)有極顯著差異，但在長(zhǎng)白豬中無(wú)顯著差異。 分析粘附型與仔豬斷奶前生產(chǎn)性能的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，對(duì)3種F4菌株表現(xiàn)粘附(有受體)的仔豬其

5、初生重、斷奶重和斷奶前日增重與表現(xiàn)為非粘附(無(wú)受體)的仔豬無(wú)顯著差異(p>0.05)。 利用PDT進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析的結(jié)果表明，在我們所選擇的區(qū)段內(nèi)不存在F4ad受體基因座位。對(duì)于F4ac受體基因來(lái)說(shuō)，把弱粘附歸為粘附時(shí)，F(xiàn)4ae受體基因與S0283與CGT25存在顯著相關(guān)，與CGT25的相關(guān)性最高，并達(dá)到極顯著水平，把弱粘附歸為非粘附時(shí)，F(xiàn)4ac受體基因與S0283，CGT25，SWl876的相關(guān)均達(dá)到顯著水平，但是與S0283的相

6、關(guān)性最高，達(dá)到極顯著水平。我們推斷在S0283-CGT25或者S0283-CGT25-SWl876之間1.6cM的范圍內(nèi)存在影響F4ac受體有無(wú)的基因座位。對(duì)F4ab受體基因來(lái)說(shuō)，把弱粘附歸為粘附時(shí)，F(xiàn)4ab受體基因與S0283、CGT25、SW1833顯著相關(guān)，其中與S0283的相關(guān)性最高，當(dāng)賦予各家系相同的權(quán)重時(shí)，F(xiàn)4ab受體基因與CGT25不存在相關(guān)。把弱粘附歸為非粘附時(shí)，F(xiàn)4ab受體基因與S0283，CGT25，SW1876，S