稻瘟病菌中RNAi通用高效載體的構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、稻瘟病是一種毀滅性病害，給全世界的水稻生產帶來巨大威脅，其病原菌為稻瘟病菌Magnaporthe oryzae。了解稻瘟病菌的致病機理不僅有利于稻瘟病的防治，而且作為研究植物病原真菌與寄主互作的理想模式，對于理解其它真菌的致病機理也有重要意義。細胞分裂是活細胞繁殖的過程。在多細胞生物中，細胞分裂是個體生長、發(fā)育和分化的基礎。因此，研究細胞分裂相關基因具有重要意義。
　　 RNA干涉(RNA interference,RNAi)是

2、指由雙鏈RNA(double-strandedRNA,dsRNA)誘發(fā)同源mRNA高效特異性降解的現象。目前,RNAi技術被廣泛應用于基因功能的研究。對于致死基因的研究,RNAi技術顯示獨特的優(yōu)勢。
　　 本文構建了RNAi高效載體并克隆了稻瘟病菌中的細胞分裂相關基因MoCDC45,通過RNAi分析了MoCDC45基因在稻瘟病菌致病性及其他相關過程的作用。具體研究結果如下：
　　 (1)以水稻中進行光合作用暗反應的RUB

3、P羧化酶因子mRNA的3'-UTR中的一段序列作為發(fā)卡結構的兩個臂，構建含有GFP的RNAi表達載體。
　　 (2)通過熒光顯微鏡下熒光觀察、RT-PCR、Southern雜交驗證RNAi表達載體具有干涉的高效性，與對照菌株Guy11-GFP相比，其表達量下降約100倍。
　　 (3)利用稻瘟病菌基因組序列，克隆了酵母CDC45在稻瘟病菌中的同源基因，定名MoCDC45。通過構建MoCDC45的RNAi表達載體和農桿菌轉

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