牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)卵黃抗體制備及其對病毒中和活性研究.pdf

1、牛病毒性腹瀉（Bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的多癥狀、多宿主為特征的一種重要的傳染病。該病的隱性感染以持續(xù)感染和免疫耐受為特點(diǎn)，會(huì)持久帶毒、排毒，成為常在傳染源，是造成BVDV廣泛傳播的重要因素。若持續(xù)感染牛感染同源的CP型BVDV時(shí)可導(dǎo)致黏膜病，發(fā)生嚴(yán)重腹瀉，病死率幾乎100％，據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界每年死于此病感染的牛不少于500

2、萬頭。隨著新疆養(yǎng)牛業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大，BVDV感染呈上升趨勢，如不采取相應(yīng)的措施，會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前還沒有關(guān)于應(yīng)用卵黃抗體（egg yolk antibodies，IgY）對BVDV引起的感染進(jìn)行被動(dòng)免疫治療的研究報(bào)道。因此，本研究主要通過將致細(xì)胞病變型（cytopathic，CP）BVDV標(biāo)準(zhǔn)毒和非致細(xì)胞病變型（ncytopathic，NCP）BVDV新疆分離株免疫產(chǎn)蛋雞，制備抗BVDV卵黃抗體，并對該卵黃抗體進(jìn)行體內(nèi)、體外中和活

3、性研究，從而為防治本病提供新的思路和方法。 本實(shí)驗(yàn)通過MDBK細(xì)胞增殖BVDV，收集病毒細(xì)胞培養(yǎng)物，利用PEG法濃縮得到純度較高的病毒，用免疫過氧化物酶單層實(shí)驗(yàn)的方法，測定濃縮毒的毒價(jià)。繼而以濃縮的NCP型BVDV（新疆分離株）和CP型BVDV（標(biāo)準(zhǔn)毒）作為抗原免疫健康產(chǎn)蛋雞，收集雞蛋，用改良PEG6000法提取卵黃抗體。采用瓊脂擴(kuò)散法和間接ELISA法測定IgY效價(jià)，用微量法測定所得卵黃抗體中和病毒效價(jià)。在臨床試驗(yàn)中，選取12

4、頭BVDV隱性感染犢牛，用所制備的IgY進(jìn)行治療，治療后再次用本實(shí)驗(yàn)室建立的巢式RT-PCR進(jìn)行檢測，統(tǒng)計(jì)陰性犢牛數(shù)，計(jì)算消除率。 研究結(jié)果顯示，瓊脂擴(kuò)散法測定IgY最后一次免疫后14天的效價(jià)，抗NCP型BVDV和CP型BVDV的效價(jià)均為1：32，間接ELISA法測定抗NCP型BVDV效價(jià)為1：40000、CP型BVDV效價(jià)為1：32000，體外中和NCP型BVDV效價(jià)為1×10-3，三個(gè)月后再次檢測，卵黃抗體效價(jià)未見明顯下降；