三角帆蚌內(nèi)臟團(tuán)插核手術(shù)后免疫防御調(diào)節(jié).pdf

1、三角帆蚌是我國特有的培育淡水珍珠的主要蚌種。隨著淡水珍珠業(yè)的發(fā)展，三角帆蚌蚌病的頻發(fā)，給育珠生產(chǎn)造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。插核手術(shù)尤其是內(nèi)臟團(tuán)插核手術(shù)，操作時(shí)間長，造成的創(chuàng)傷口大，更增加了三角帆蚌疾病感染的風(fēng)險(xiǎn)率。如何增強(qiáng)三角帆蚌非特異性免疫系統(tǒng)，增加其抗病能力成為珍珠培育中的重要課題。三角帆蚌自身的免疫系統(tǒng)是其抵御外來病原生物入侵的屏障，主要依靠血細(xì)胞的吞噬和血淋巴中各種非特異的免疫活性因子的識(shí)別、調(diào)節(jié)和殺傷等作用。血細(xì)胞形態(tài)特征的鑒別是研

2、究雙殼類免疫學(xué)的基礎(chǔ)。為了探討內(nèi)臟團(tuán)插核手術(shù)后三角帆蚌免疫防御機(jī)制，本文從血細(xì)胞形態(tài)學(xué)，免疫相關(guān)酶活性和免疫相關(guān)基因表達(dá)，以及內(nèi)臟團(tuán)有核珍珠培育四個(gè)方面開展了研究。 利用相差顯微鏡、光學(xué)顯微鏡、透射電子顯微鏡和流式細(xì)胞儀對(duì)插核手術(shù)5d三角帆蚌血細(xì)胞進(jìn)行了形態(tài)學(xué)研究，采用熒光定量RT-PCR方法和酶活測(cè)定方法研究了三角帆蚌插核手術(shù)后第1、2、3、5、10d免疫相關(guān)基因alpha-2巨球蛋白（α2M）的表達(dá)情況和免疫相關(guān)酶酸性磷酸酶

3、（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）活性變化情況。流式細(xì)胞術(shù)光散射圖譜顯示血細(xì)胞被分兩類，一類為顆粒度高的大細(xì)胞，另外一類為顆粒度低的小細(xì)胞；相差顯微鏡觀察顯示，血細(xì)胞可分為胞體暗、折光性差和胞體明亮、折光性強(qiáng)的兩類；Giemsa和H.E染色顯示細(xì)胞分為胞質(zhì)染色不均一、胞內(nèi)顆粒明顯和胞質(zhì)染色均一、胞內(nèi)顆粒不明顯的兩類；透射電鏡超薄切片觀察顯示，顆粒明顯的細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)線粒體、高爾基體等細(xì)胞器較豐富，顆粒不明顯的細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器較少；負(fù)染結(jié)果

4、表明血細(xì)胞主要分為表面不光滑、突起明顯和細(xì)胞表面光滑、突起較不明顯的兩類，綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，三角帆蚌血細(xì)胞從形態(tài)學(xué)可分為顆粒明顯的細(xì)胞和顆粒不明顯的透明細(xì)胞兩大類。插核手術(shù)后，顆粒細(xì)胞數(shù)量相對(duì)增加，透明細(xì)胞數(shù)量相對(duì)減少，說明顆粒細(xì)胞發(fā)揮著主要免疫功能。并且血細(xì)胞表面形態(tài)更多樣，偽足狀突起更明顯，細(xì)胞內(nèi)囊泡狀物質(zhì)增多，血細(xì)胞密度顯著增高（p<0.01），兩類細(xì)胞所占比例的變化在相差顯微鏡觀測(cè)中差異極顯著（p<0.01）。α2M基因在手術(shù)后

5、表達(dá)量增加，在第3、5d與對(duì)照組有顯著性差異。血清和血細(xì)胞中ACP活性實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組，血清中ACP活性實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組有顯著性差異，血細(xì)胞中ACP活性第1、2、3d有顯著性差異。血清中SOD活性實(shí)驗(yàn)組均高于對(duì)照組，第3、5、10d有顯著性差異，血細(xì)胞中SOD的活性實(shí)驗(yàn)組均低于對(duì)照組，第3d差異不顯著，其余時(shí)間差異顯著。 三角帆蚌內(nèi)臟團(tuán)有核珍珠培育的初步研究證實(shí)了細(xì)胞植入法內(nèi)臟團(tuán)有核珍珠培育的可行性。雖然施術(shù)貝在插核手術(shù)第10天