甘藍(lán)型油菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育系L04-05A育性分析及其恢復(fù)基因的SSR標(biāo)記.pdf

1、本研究以甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院育成的甘藍(lán)型油菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育系L04-05A與恢復(fù)材料L04-05C1、L04-05C2配制的F1、F2分離群體為材料，采用分離群體分組分析法（BSA），進(jìn)行了油菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育育性恢復(fù)基因分子標(biāo)記的篩選及連鎖分析。同時(shí)，對SSR（Simple sequence repeat，簡單重復(fù)序列）技術(shù)在油菜分子育種中的應(yīng)用做了探索。主要結(jié)果如下： 1．對不育材料PL CMS（L04-05A）與相同保持系的P

2、ol CMS（Pol5A）、Ogu CMS的花器形態(tài)特征等研究表明，PLCMS（L04-05A）在植物學(xué)形態(tài)特征方面表現(xiàn)為花冠直徑大、花瓣大，花瓣平展；不育性徹底、穩(wěn)定，盛花期鏡檢花藥，未發(fā)現(xiàn)可育花粉粒。PL CMS與Pol CMS具有明顯差異，與Ogu CMS也有一定差異，為不同于Pol CMS、Ogura CMS的一種新的不育細(xì)胞質(zhì)類型。 2．通過對甘藍(lán)型油菜細(xì)胞質(zhì)雄性不育系L04-05A育性恢復(fù)基因與恢復(fù)材料L04-05C

3、1，L04-05C2雜交的F2群體考查，發(fā)現(xiàn)兩群體可育株與不育株的分離比例為4，30：1和2．73：1，X2C值分別為2．5384和0．3898，均小于X20．05，1，符合3：1的分離比，呈孟德爾式遺傳。這表明PLCMS（L04-05A）育性恢復(fù)基因rfp受一對顯性基因控制的簡單遺傳。 3．以甘藍(lán)型油菜基因組DNA為模板，從DNA、Taq酶、dNTPs、引物4種因素對甘藍(lán)型油菜PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，建立了適合于甘藍(lán)型油菜的S

4、SR優(yōu)化反應(yīng)體系，反應(yīng)體積為25μl，Mg2+為2．0ul（濃度為2．5mM），dNTPs為2．0ul（濃度為2．5mM），10×buffer為2．5ul（濃度為7．5mM），Taq酶0．4ul（濃度為2．5 U/ul），引物為4ul（濃度為10uM），模板DNA為1ul（濃度為15-40 ng/L）。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，51℃復(fù)性30s，72℃延伸1min，30循環(huán)，72℃延伸5min。

5、4．分別利用6號F2群體和9號F2群體構(gòu)建的可育DNA混合池和不育DNA混合池對60引物進(jìn)行了篩選；再用在兩個(gè)DNA混合池之間顯示有差異條帶的一對引物，對用構(gòu)建混合池所用的單株進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)引物0113-E08擴(kuò)增的分子量為150bp的條帶為可育株特異標(biāo)記，在不育單株中未擴(kuò)增出該條帶，重復(fù)性好。進(jìn)一步用引物0113-E08分別對6號和9號F2群體進(jìn)行擴(kuò)增，確定0113-E08-150bp為與PLCMS（L04-05A）育性恢復(fù)基因