腐爛莖線蟲不同群體同工酶表型與生物學(xué)特性研究.pdf

1、甘薯莖線蟲病是我國甘薯生產(chǎn)上重要病害之一，該病病原腐爛莖線蟲（Ditylenchusdestructor）為我國檢疫性病害。腐爛莖線蟲最早在馬鈴薯上發(fā)現(xiàn)，該線蟲除了危害甘薯外，還危害花生、茄子、薄荷、甜菜和草莓等作物。本實(shí)驗(yàn)以來自國內(nèi)的10個(gè)腐爛莖線蟲群體為研究材料，做了以下幾方面的研究：
　　 對國內(nèi)不同地理來源的10個(gè)腐爛莖線蟲群體進(jìn)行同工酶表型研究。結(jié)果表明：1）在對DeJL，和DeLJ2個(gè)群體的同工酶梯度分析中發(fā)現(xiàn)，碾樣

2、200、400、600條線蟲的10μl提取液中，只有碾樣400條線蟲提取液對DeJL和DeLJ表型研究均有較好的染色效果；2）10個(gè)群體蘋果酸脫氫酶（MDH）酶譜分為2個(gè)酶型，酶型Ⅰ的相對遷移率（Rf值）約為0.21、0.26；酶型Ⅱ的Rf值約為0.21、0.26、0.31，而酯酶染色不成形；3）結(jié)合MDH表型和核糖體ITS區(qū)核酸序列分析，將腐爛莖線蟲劃分為3個(gè)不同遺傳類型。
　　 對國內(nèi)不同地理來源的10個(gè)腐爛莖線蟲群體在兩個(gè)

3、中抗甘薯莖線蟲病品種（蘇薯9號、寧薯9-9）上測定腐爛莖線蟲群體致病力、繁殖力、雌雄比（性比）、甘薯薯塊鮮重?fù)p失量。結(jié)果表明：1）在P=0.05水平上，各群體間的致病力、繁殖力、性比差異顯著，其中致病力最高的群體來自河北廊坊DeHB，對蘇薯9號的致病力為75％（即蘇薯的病情指數(shù)為75％）；2）在蘇薯9號和寧薯9-9上，各線蟲群體致病力與線蟲繁殖力呈正相關(guān)；3）偏相關(guān)分析顯示，在蘇薯9號上不同線蟲群體繁殖力與性比呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)低，只為

4、-0.213，而在寧薯9-9上不同群體繁殖力與性比呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)高，為0.901，說明寄主品種的改變對線蟲群體性別分化影響顯著；4）在抗甘薯莖線蟲病和保鮮力方面，寧薯9-9分別比蘇薯9號高33.48％和19.86％。
　　 將腐爛莖線蟲2個(gè)基因型進(jìn)行雜交，在48個(gè)正反交組合中，33個(gè)雜交組合未產(chǎn)生后代，15個(gè)組合產(chǎn)生的F1代死亡，2個(gè)組合“DeLYxDeYL”，和“DeSDxDeHB”，產(chǎn)生活力很弱的F1代幼蟲，繼代培養(yǎng)

5、未能產(chǎn)生可延續(xù)的后代；所有的雜交組合中所產(chǎn)生的F1代均為幼蟲且其數(shù)量在P0.05水平上均顯著低于親本對照組；對“DeLYxDeYL”和“DeSDxDeHB”2個(gè)組合的F1代進(jìn)行ITS-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物和RsaⅠ、HaeⅢ、Hinf I3種內(nèi)切酶的酶切（RFL，P）分析顯示，F(xiàn)1代ITS區(qū)PCR產(chǎn)物與其母本條帶長度較一致，約為800bp，2個(gè)雜交代與其親本的酶切圖譜在3個(gè)酶切位點(diǎn)上差異顯著；對同一基因型內(nèi)的線蟲種群間雜交發(fā)現(xiàn)，雜交均能成功且

6、產(chǎn)生可育的后代，對其F1代同樣進(jìn)行ITS區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物和RFLP分析，發(fā)現(xiàn)同一基因型內(nèi)雜交后代ITS區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物和RFLP圖譜與其親本一致。說明我國甘薯腐爛莖線蟲種群間分化現(xiàn)象嚴(yán)重，變異復(fù)雜，即基因型A4個(gè)種群分別與基因型B6個(gè)種群間雜交不親和，存在生殖隔離現(xiàn)象，我國甘薯腐爛莖線蟲很可能是一個(gè)包含兩種不同線蟲的復(fù)合種。
　　 對5個(gè)不同地理來源的腐爛莖線蟲群體分別接種到甘薯（待其發(fā)病腐爛時(shí)做以下實(shí)驗(yàn)處理）、甘油和細(xì)沙3種介質(zhì)中，在-2

7、0℃和-70℃溫度下經(jīng)過不同的處理時(shí)間測定其存活率來研究腐爛莖線蟲耐寒力，并探索腐爛莖線蟲在低溫冷凍下的保存方法。腐爛莖線蟲在-20℃和-70℃低溫下，隨著處理時(shí)間的延長，不同群體線蟲的存活率都有所下降，其中DeWY和DeLJ群體在不同處理時(shí)間下的存活率均高于其它3個(gè)群體，且在P0.01水平下均達(dá)到極顯著差異，初步證實(shí)這2個(gè)群體有很強(qiáng)的耐寒力。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在細(xì)沙和不同甘油濃度條件下，所有線蟲群體在低溫處理下均未查到活蟲。腐爛莖線蟲在低溫下的