高原鼢鼠不同季節(jié)不同組織乳酸脫氫酶活力及同工酶譜的研究.pdf

1、通過對低氧高二氧化碳環(huán)境中高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi)在不同季節(jié)血清中乳酸(Lactate，LD)含量、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)活力以及乳酸脫氫酶(LDH)同工酶譜的測定，探討高原鼢鼠對低氧高二氧化碳的適應機制。 方法 斷頸，取凝血，離心4000轉(zhuǎn)10min后，取上清液，制備血清。用分光光度法測定血．清LD的含量、LDH活力，用連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定血清LD

2、H同工酶譜，安裝夾芯式垂直板電泳槽，制備分離膠和濃縮膠，待凝膠聚合后，取血清10uL，加入20uL40％蔗糖和50uL0.1％溴酚蘭，混勻后，用微量注射器吸取6uL，加入凹形樣品槽里。加樣后，打開電源，將電流調(diào)至10 M A/板，待樣品進入分離膠后，改為20-25M A/板，等清晰的蘭紫色酶帶出現(xiàn)距膠底1 cm處停止電泳。立即染色，脫色，將凝膠板放入保存液中浸泡2-3小時。然后對不同季節(jié)血清LDH同工酶譜進行比較性分析。 結(jié)果

3、 高原鼢鼠血清中LD含量、LDH活力及LDH同工酶譜發(fā)生明顯的季節(jié)性變化的趨勢。LD含量、LDH活力在隨著春季、夏季、秋季不同季節(jié)的變化而顯著減小(P<0.05)，血清中LD含量在春季、夏季和秋季分別為6．98±1.20mmol/L，6.65±1.80 mmol/L，3.17±0.38 mmol/L；LDH活力在春季、夏季和秋季分別為5865.79±1338.94 U/mg，4493.73±1153.47 U/mg，3338.1

4、1±523.74 U/mg。高原鼢鼠血清中LDH同工酶譜在不同的季節(jié)有不同的酶帶，在春季LDH同工酶含有明顯的5條區(qū)帶，即LDH<,1>、LDH<,2>、LDH<,3>、LDH<,4>、LDH<,5>，均著色深且?guī)捅容^寬，夏季除LDH<,3>、LDH<,4>、LDH<,5>的區(qū)帶著色變淡變窄外，LDH<,1>、LDH<,2>酶帶幾乎消失。秋季變化更明顯，除LDH<,5>區(qū)帶外，其他的酶帶幾乎消失。 結(jié)論 血清中LD含

5、量、LDH活力以及血清中LDH同工酶譜隨季節(jié)的變化而呈現(xiàn)明顯變化的趨勢。 目的:通過對低氧高二氧化碳環(huán)境中高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi) 不同組織乳酸脫氫酶 (LactateDehvdrogerlase，LDH)活力及同工酶譜在不同季節(jié)的變化，探討高原鼢鼠特殊生存環(huán)境的特異生理機能和代謝機制。 方法 動物經(jīng)5％J2戊巴比妥鈉腹腔麻醉后，取每只高原鼢鼠心、肝、肺、腎、腦和骨骼肌6種組織，放入4℃預冷

6、的0.9％NaCL(即生理鹽水)中沈去血污，再稱取各組織約0.5g，按w/v=1/4比例加入4℃預冷的0.9％NaCL2ml，用研缽冰浴勻漿，勻漿液置入試管中，經(jīng)10000r/min離心20min，取上清液用于酶活力測定和LDH同工酶的電泳分析。 LDH酶活力測定：用0.1 mol/L PH7.5磷酸鹽緩沖液在紫外可見分光光度計中340nm處調(diào)零，然后依次加入丙酉同酸鈉溶液2.9ml，NADH0.1ml，搖勻后，每隔0.5min

7、測340nM處的吸光值(A<,340nm>、}連續(xù)測定3min，計算A<,340nm/min>．減少值，可得細．織提取液中LDH活力(U/mL)。數(shù)據(jù)用SPSS Version11.0統(tǒng)計軟件處理。 LDH同工酶的電泳分析：采用聚丙烯酰胺凝膠垂直平板電泳分離法，濃縮膠濃度2.5％，分離膠濃度7.0％，電極緩沖液Tris-甘氨酸緩沖液，6ul點樣。開始電泳時電流為10mA，待樣品進入分離膠時，將電流調(diào)至25mA，約進行4小時左右

8、。電泳結(jié)束后，取LDH膠片放入配好的染色液中，避光37℃20分鐘。然后用水漂洗數(shù)次，放入保存液中保存。然后對不同季節(jié)血清LDH同工酶譜進行比較性分析。 結(jié)果 高原鼢鼠心、腦和骨骼肌LDH活力隨著春季、夏季和秋季的變化顯著減小(P<0.05)。骨骼肌各季組LDH活力高于心肌各季組LDH活力。在不同季節(jié)中，高原鼢鼠不同組織中LDH的同工酶譜帶是不同的，存在著組織特異性。高原鼢鼠心和腎以LDH<,1>為主。在夏季，高原鼢鼠骨骼

9、肌以LDH<,1>LDH<,3>為主。在春季、夏季和秋季中，高原鼢鼠LDH同工酶在不同組織中表現(xiàn)出分布特異性，并通過改變LDH活力和LDH同工酶，來維持機體的氧平衡。 結(jié)論 高原鼢鼠心、肝、肺、腎、腦、骨骼肌LDH活力及LDH同工酶隨著春季，夏季和秋季的變化呈現(xiàn)出變化的趨勢。LDH同工酶的基因表達，在春季，夏季和秋季三個季節(jié)中有著組織特異性的差異，不同組織的LDH活力及其LDH同工酶譜的變化與其生存的特殊環(huán)境的特異生理機