豬鏈球菌2型疫苗候選株的生物學(xué)特性研究.pdf

1、豬鏈球菌分35種血清型，其中豬鏈球菌2型（Streptococcus suis serotype2，SS2）流行最廣，發(fā)病率最高，而且可感染人致死，是一種重要的人畜共患病病原。由SS2引起的豬鏈球菌病常呈散發(fā)或地方性爆發(fā)，發(fā)病率和死亡率均很高，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。目前，豬鏈球菌2型疫苗研制大多集中在基因工程疫苗上，但由于豬鏈球菌2型致病因子復(fù)雜，單獨(dú)以一種或幾種毒力因子制成的亞單位苗不能起到完全的免疫保護(hù)作用。因此，滅活疫苗仍然有著不

2、可替代的作用。研制出一種免疫原性好，副作用小的的滅活疫苗對(duì)日益增多的豬鏈球菌2型引起的鏈球菌病的預(yù)防有著重要意義。
　　 為了篩選出生物學(xué)特性較為穩(wěn)定的疫苗候選株，選取豬鏈球菌2型的7種主要毒力因子設(shè)計(jì)并合成引物，用PCR方法對(duì)四株豬鏈球菌2型分離株進(jìn)行檢測(cè)。將各菌株連續(xù)傳代培養(yǎng)至20代，用API20 Strep生化鑒定試劑條和全自動(dòng)生化分析儀對(duì)同一菌株各代次之間進(jìn)行比較鑒定。結(jié)果顯示，除SS2 BB071118株缺乏orf2外

3、，其他分離株均同時(shí)具有被檢測(cè)的7種毒力因子，屬于豬鏈球菌2型高致病菌株；生化試驗(yàn)結(jié)果表明，除了SS2 HA060821株高度穩(wěn)定外，其他菌株個(gè)代次之間均存在不同程度的差異，因此最終確定SS2 HA060821為疫苗候選菌株。
　　 以斑馬魚作為豬鏈球菌2型感染的動(dòng)物模型，對(duì)SS2 HA060821株F1代和F20代菌株進(jìn)行致病性比較。斑馬魚經(jīng)腹腔注射接種F1代和F20代不同稀釋度菌液，統(tǒng)計(jì)一周內(nèi)斑馬魚死亡數(shù)量。結(jié)果顯示，攻毒后死

4、亡的斑馬魚具有典型的細(xì)菌性敗血癥病理變化，腹腔可分離到SS2菌株。HA060821株F1代和F20代菌株對(duì)斑馬魚的LD50分別為8.9×104 CFU和9.5×104 CFU，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明二者毒力差異不顯著（P>0.05）。證明SS2 HA060821株經(jīng)過20代傳代培養(yǎng)后毒力仍然穩(wěn)定，因此建立了SS2HA060821株F1代和F20代基礎(chǔ)種子批次，作為滅活疫苗的研究對(duì)象。
　　 為評(píng)價(jià)豬鏈球菌2型HA060821株制備的

5、滅活疫苗對(duì)豬的免疫保護(hù)效力，將25頭豬隨機(jī)分成5組，分別用HA060821 F1、F20滅活疫苗，HA9801 F1、F20滅活疫苗和PBS對(duì)豬進(jìn)行免疫，并用ZY05719強(qiáng)毒株進(jìn)行效力檢驗(yàn)；同時(shí)設(shè)立免疫HA060821滅活疫苗的抗體監(jiān)測(cè)組，用間接ELISA法檢測(cè)HA060821滅活疫苗免疫豬的抗體水平。結(jié)果顯示監(jiān)測(cè)組在第7天抗體均呈陽性，其中一次免疫組在第28天抗體效價(jià)達(dá)高峰；二次免疫組在第42天抗體水平達(dá)到高峰，抗體效價(jià)分別為1:3