豬鏈球菌2型Egfp-HA9801重組株的生物學特性和在BALB-C小鼠體內(nèi)的感染動態(tài).pdf

1、豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）為革蘭氏陽性菌，根據(jù)菌體莢膜抗原特性的不同，可以分成35個血清型，其中以SS2流行最廣、致病性最強。SS2不僅可引起豬腦膜炎、關節(jié)炎、敗血癥、肺炎和突然死亡，嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，而且可感染特定人群并致死，是一種重要的人畜共患病病原菌。SS2的致病機制目前尚不明確，Egfp-HA9801重組菌株帶有增強型綠色熒光蛋白基因（egfp）和壯觀霉素抗性基因（spcr），通過同源重組方法構(gòu)建

2、而成，希望以此菌株作為綠色熒光蛋白標記菌株來研究SS2的致病機制.然而對Egfp-HA9801重組菌株的生物學特性、動物體內(nèi)感染動態(tài)及熒光特性的考察是利用其研究SS2致病機制的重要前提。
　　 通過菌落形態(tài)觀察、溶血性檢測、生化試驗和生長曲線測定等，比較Egfp-HA9801重組菌株與HA9801野生菌株的生物學特性。結(jié)果顯示Egfp-HA9801的各項生物學特性穩(wěn)定且和HA9801基本相同，表明在SS2基因組中插入egfp和s

3、pcr基因未對其生物學特性產(chǎn)生顯著影響，這為應用Egfp-HA9801重組菌株研究SS2的動態(tài)感染機制奠定了基礎.
　　 以BALB/C小鼠為動物感染模型，進行S.suis2 Egfp-HA9801重組菌株和HA9801野生菌株的動物體內(nèi)感染動態(tài)的比較試驗.采用腹腔注射的方式，兩菌株分別以不同稀釋度的菌液接種各試驗組小鼠，觀察小鼠臨床癥狀，統(tǒng)計72h內(nèi)小鼠死亡數(shù)量，在接種1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h時進行感染小鼠

4、組織的活菌計數(shù)，繪制各組織器官內(nèi)細菌含量動態(tài)變化曲線，同時對從感染小鼠體內(nèi)分離的細菌進行鑒定。結(jié)果顯示，Egfp-HA9801和HA9801接種小鼠后，小鼠均出現(xiàn)急性感染癥狀，并能從感染小鼠體內(nèi)分離到相應菌株。兩菌株的LD50分別為3.200×108CFU和3.259x108CFU，且各組織器官內(nèi)細菌含量動態(tài)變化曲線也基本相同，統(tǒng)計學分析結(jié)果表明毒力和感染后各組織器官內(nèi)細菌含量兩菌株差異不顯著（P>0.05）。這表明Egfp-HA980

5、1重組菌株在毒力、感染后臨床癥狀、感染進程方面與HA9801野生株基本相同，提示其可以作為標記菌株來研究自然狀態(tài)下SS2的動態(tài)感染機制。
　　 應用熒光顯微鏡對Egfp-HA9801的熒光特性進行初步檢測。細菌分別在28℃、30℃和37℃條件下進行體外培養(yǎng)，將培養(yǎng)12h、24h、36h和48h的菌液涂片鏡檢，同時以6.0╳108CFU的細菌量腹腔注射BALB/C小鼠，于攻毒1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h后處死小鼠取