北美—球懸鈴木轉(zhuǎn)基因受體系統(tǒng)的建立及遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、 本研究以北美一球懸鈴木莖段為外植體，系統(tǒng)研究了組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基、植物激素、有機(jī)附加物等因素對(duì)芽誘導(dǎo)、不定芽增殖及不定芽生根的影響；建立了適于北美一球懸鈴木遺傳轉(zhuǎn)化的穩(wěn)定高效的組培受體系統(tǒng)；研究了9個(gè)影響北美一球懸鈴木轉(zhuǎn)化效果的因素，確定了較為合適的北美一球懸鈴木葉盤轉(zhuǎn)化體系，為北美一球懸鈴木基因工程育種提供了關(guān)鍵的技術(shù)平臺(tái)。從北美一球懸鈴木截冠植株上采取當(dāng)年生萌蘗枝條作為起始外植體，讓外植體帶有部分葉柄進(jìn)行消毒，避免直接消毒Hg

2、Cl2對(duì)裸芽的傷害。在芽增殖培養(yǎng)基上繼代4次之前，每次繼代芽的增殖水平無(wú)變化；繼代4次以后，隨著繼代次數(shù)的增加，增殖系數(shù)有明顯的遞增趨勢(shì)；但第9代起，開(kāi)始出現(xiàn)玻璃苗，而且隨后幾代盡管增殖系數(shù)顯著增加，但玻璃化越趨嚴(yán)重，而有效芽的增殖系數(shù)大大下降。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了兩條生根技術(shù)路線：一步法生根，將不定芽直接接種在含有機(jī)物質(zhì)R150mg/L的DCR上；二步生根法，先將不定芽接種在含有機(jī)物質(zhì)R60mg/L的DCR上15d左右，再轉(zhuǎn)接至DCR基本培養(yǎng)

3、基上。兩條途徑的生根率均有100﹪。　　建立了以北美一球懸鈴木試管苗頂端的第一、二片完全展開(kāi)的葉片為外植體，探討了暗培養(yǎng)時(shí)間、蔗糖濃度、NAA、IBA、6-BA、KT、ZT、TDZ濃度等因素對(duì)葉盤分化不定芽的影響，最終建立了以葉盤為外植體的高頻再生系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn)：以MS為基本培養(yǎng)基并附加IBA0.5mg/L、6-BA1.5mg/L、KT0.5mg/L、蔗糖30g/L，對(duì)北美一球懸鈴木葉盤誘導(dǎo)不定芽是最有效的培養(yǎng)基，暗培養(yǎng)7d時(shí)，芽誘導(dǎo)

4、頻率、平均芽數(shù)和芽形成能力最高，分別為82.7﹪、4.2和3.47。經(jīng)實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)：TDZ在一球懸鈴木的葉盤培養(yǎng)中，沒(méi)有類似于細(xì)胞分裂素的作用，非但不能促進(jìn)不定芽分化，反而有抑制作用?！　”驹囼?yàn)已建立起一個(gè)高效的北美一球懸鈴木葉盤離體再生及遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)，可以進(jìn)一步開(kāi)展農(nóng)桿菌介導(dǎo)的北美一球懸鈴木轉(zhuǎn)基研究。探討Ap(氨芐青霉素)、Cb(羧芐青霉素)、Cef(頭孢霉素)等三種常用的抑菌性抗生素對(duì)葉盤分化不定芽的影響?！　y(cè)試了Km對(duì)葉盤