黃瓜果實(shí)特異性基因CFSP-1啟動(dòng)子的克隆與功能分析.pdf

1、CFSP-1蛋白是本實(shí)驗(yàn)室通過蛋白質(zhì)雙向電泳的方法獲得的黃瓜果實(shí)特異性蛋白，并已成功克隆到該蛋白的cDNA序列。
　　 本研究以黃瓜基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增獲得CFSP-1的基因組DNA序列。將克隆得到的CFSP－1基因組DNA序列與其cDNA序列進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)該基因含有6個(gè)內(nèi)含子，對得到的內(nèi)含子序列進(jìn)行分析，所有內(nèi)含子的AT平均含量為67％，外顯子序列為55％，內(nèi)含子的AT含量明顯高于外顯子。在此基礎(chǔ)上，采用RAPD替代

2、TAIL－PCR中常用的隨機(jī)簡并引物，進(jìn)行過多次TAIL－PCR，發(fā)現(xiàn)RAPD引物有時(shí)3'端僅僅有4、5個(gè)堿基與模板結(jié)合就可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增，為此，若每輪TAIL-PCR篩選10-20個(gè)RAPD引物，經(jīng)過2-4輪就可以得到目的片段。本研究采用上述改良的TAIL-PCR方法成功獲得該基因的5'上游序列510 bp的啟動(dòng)子序列。用CFSP-1基因的啟動(dòng)子定向替換pBI121載體上的CaMV35S啟動(dòng)子，構(gòu)建了pBI121-proCFSP載體