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文檔簡介
1、CFSP-1蛋白是本實驗室通過蛋白質(zhì)雙向電泳的方法獲得的黃瓜果實特異性蛋白，并已成功克隆到該蛋白的cDNA序列。
本研究以黃瓜基因組DNA為模板，PCR擴增獲得CFSP-1的基因組DNA序列。將克隆得到的CFSP－1基因組DNA序列與其cDNA序列進行比較，發(fā)現(xiàn)該基因含有6個內(nèi)含子，對得到的內(nèi)含子序列進行分析，所有內(nèi)含子的AT平均含量為67％，外顯子序列為55％，內(nèi)含子的AT含量明顯高于外顯子。在此基礎(chǔ)上，采用RAPD替代
2、TAIL－PCR中常用的隨機簡并引物，進行過多次TAIL－PCR，發(fā)現(xiàn)RAPD引物有時3'端僅僅有4、5個堿基與模板結(jié)合就可以進行PCR擴增，為此，若每輪TAIL-PCR篩選10-20個RAPD引物，經(jīng)過2-4輪就可以得到目的片段。本研究采用上述改良的TAIL-PCR方法成功獲得該基因的5'上游序列510 bp的啟動子序列。用CFSP-1基因的啟動子定向替換pBI121載體上的CaMV35S啟動子，構(gòu)建了pBI121-proCFSP載體
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