它莫西芬對仔豬子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞MUC1和CD44的影響.pdf

1、哺乳動(dòng)物胚胎和子宮內(nèi)膜相互作用的分子機(jī)制仍然是細(xì)胞發(fā)育生物學(xué)上的難題。從臨床上來看,雖然人工受精和胚胎移植技術(shù)在近十年取得進(jìn)步,但胚胎植入的成功率還是沒有想象中那樣好,這提示我們子宮在胚胎植入過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。子宮內(nèi)一些重要的分子(包括可溶性分子和細(xì)胞表面分子)調(diào)節(jié)著胚胎植入過程。另一方面,在不同物種中,子宮接受胚胎的能力受到子宮內(nèi)類固醇激素的影響。探討哪些分子有利于胚泡著床顯得尤為重要。研究表明,糖蛋白MUC-1的過表達(dá)可以阻

2、止細(xì)胞與基質(zhì)之間的黏附,因此在胚胎植入時(shí),MUC-1在子宮上皮細(xì)胞的高表達(dá)可以阻止胚胎著床,而MUC-1的下調(diào)是胚胎植入“窗口”所必須。CD44是在子宮上皮的另一種糖蛋白,在早孕、假孕和不孕兔子子宮內(nèi),研究者發(fā)現(xiàn):在非孕兔子宮內(nèi)膜上皮中無此顯型的表達(dá),在假孕兔中有弱表達(dá)且出現(xiàn)晚。而CD44在孕期第6天,即胚泡植入前1d,便開始在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞表達(dá),通過分析,證實(shí)其表達(dá)增多。CD44在植入前的兔子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的表達(dá)模式,提示其可能參與

3、植入過程。在本實(shí)驗(yàn)中,我們通過細(xì)胞培養(yǎng)、RT-PCR和免疫熒光等方法,檢測了CD44和MUC-1在豬子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的表達(dá)。同時(shí)檢驗(yàn)選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑它莫西芬是否調(diào)節(jié)CD44和MUC-1分子的表達(dá),結(jié)果如下:
　　 1.無菌采取豬子宮,用0.1％膠原酶消化分離子宮內(nèi)膜細(xì)胞,于37℃,5％CO2下培養(yǎng)。
　　 結(jié)果表明,70％細(xì)胞在24 h內(nèi)貼壁,4～5d長成單層,培養(yǎng)的細(xì)胞呈單層貼壁生長。
　　 通過對內(nèi)膜細(xì)

4、胞的純化,純化的細(xì)胞培養(yǎng)后有18-24 h的滯留期,然后進(jìn)入對數(shù)生長期,可持續(xù)2-4 d,第7天進(jìn)入平臺期,第8天開始脫落。
　　 2.用CD44和MUC-1單克隆抗體通過免疫熒光檢測,我們發(fā)現(xiàn)CD44和MUC-1在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞漿中表達(dá)。同時(shí)通過RT-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)CD44和MUC-1 mRNA在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中表達(dá)。
　　 3.為了進(jìn)一步檢測CD44和MUC-1的表達(dá)受一些外源因子調(diào)控,我們在培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞中