免疫學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

1、第三十章免疫學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制,,,掌握免疫學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制的相關(guān)概念。掌握標(biāo)準(zhǔn)品的分類及基本條件。掌握定量、半定量和定性免疫檢驗(yàn)的方法類型熟悉室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的方式、評(píng)分及意義。學(xué)會(huì)常用的免疫學(xué)質(zhì)控圖類型、結(jié)果判斷及失控的處理程序。熟練實(shí)驗(yàn)室確定人群中Cutoff值的主要方法,本章要點(diǎn),返回總目錄,目　錄,免疫學(xué)檢驗(yàn)是臨床檢驗(yàn)中一大類重要的常規(guī)檢查,對(duì)疾病的診斷、篩查、監(jiān)測(cè)疾病的發(fā)展過(guò)程和觀察患者對(duì)治療的反應(yīng)等方面發(fā)揮著重要的作用

2、。 如何保證檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量，在日常檢測(cè)中如何貫徹實(shí)施質(zhì)量保證是免疫學(xué)檢驗(yàn)的一個(gè)重要內(nèi)容。,前 言,第一節(jié) 免疫學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制的概念,免疫檢驗(yàn)要保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠、及時(shí)、有效，并盡可能使各實(shí)驗(yàn)室間檢驗(yàn)結(jié)果有可比性，這是免疫學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制的基本目的。只有明確免疫學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制的有關(guān)概念，才能真正理解免疫檢驗(yàn)的質(zhì)量控制，有助于準(zhǔn)確、有效地完成質(zhì)量控制工作。,一、基本概念,準(zhǔn)確度（accuracy） 待測(cè)物的測(cè)定值與其真值的一致性

3、程度。精密度（precision）　 一定條件下所獲得的獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果之間的一致性程度。 準(zhǔn)確度好的實(shí)驗(yàn)，其精密度不一定好，反之亦然,,準(zhǔn)確度好的實(shí)驗(yàn)，其精密度不一定好；準(zhǔn)確度差的實(shí)驗(yàn)，其精密度則不一定差；反之亦然。,測(cè)定的精密度與準(zhǔn)確度之間的關(guān)系,偏倚（bias） 待測(cè)物的測(cè)定值與可接受參考值之間的差異?？煞譃榕鷥?nèi)偏倚和批間偏倚，計(jì)算公式如下： 均值（mean）　 一組測(cè)定值中所有值的平

4、均值。計(jì)算公式如下：,標(biāo)準(zhǔn)差（standard deviation，SD或S） 又稱標(biāo)準(zhǔn)偏差，用來(lái)表示一組測(cè)定數(shù)據(jù)的分布情況，即離散度。它是反映一組數(shù)據(jù)的精密度和離散程度的最主要指標(biāo)。其計(jì)算公式如下：數(shù)據(jù)的分布情況。,變異系數(shù)（coefficient of variation，CV） 標(biāo)準(zhǔn)差與平均值之比用百分比來(lái)表示，即為變異系數(shù)。CV是相對(duì)比，沒(méi)有單位，更便于資料間的分析比較。,,,,,誤差（error） 待測(cè)

5、物的測(cè)定值與客觀存在的真值之間的差異。誤差包括系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差。 系統(tǒng)誤差是實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的誤差，它的值恒定不變或遵循一定的變化規(guī)律，通常是由儀器、方法以及操作人員等因素引起。 隨機(jī)誤差則是一類不恒定的，隨機(jī)變化的誤差，主要是由實(shí)驗(yàn)人員的操作等隨機(jī)因素所致，該誤差的出現(xiàn)難以完全避免和控制。,重復(fù)性條件（repeatability conditions）　 在短的間隔時(shí)間內(nèi),在同一實(shí)驗(yàn)室對(duì)相同的測(cè)定項(xiàng)目使用同一儀器設(shè)

6、備，由相同的操作者獲得相互獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果的條件。批（run） 在相同條件下所獲得的一組測(cè)定。,正態(tài)分布(gaussian distribution) 又稱高斯分布，指當(dāng)一質(zhì)控物用同一方法在不同的時(shí)間重復(fù)多次測(cè)定，當(dāng)測(cè)定數(shù)據(jù)足夠多時(shí)，以橫軸表示測(cè)定值，縱軸表示在大量測(cè)定中相應(yīng)測(cè)定值的個(gè)數(shù)，則可得到一個(gè)兩頭低，中間高，中為所有測(cè)定值的均值，左右對(duì)稱的“鐘形”曲線，亦即正態(tài)分布。 正態(tài)分布的基本統(tǒng)計(jì)學(xué)含義

7、 可用均數(shù)（ ）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）和概率來(lái)說(shuō)明，均數(shù)是位于曲線的正中線所對(duì)應(yīng)的值。,,,,正態(tài)分布是質(zhì)量控制圖的理論依據(jù)，也是許多統(tǒng)計(jì)方法的理論基礎(chǔ)，正常情況下測(cè)量（或?qū)嶒?yàn)）誤差服從正態(tài)分布。,,二、質(zhì)量保證的有關(guān)概念,質(zhì)量保證（quality assurance，QA） 致力于為某一產(chǎn)品或服務(wù)滿足特定的質(zhì)量要求，提供充分可信性所要求的有計(jì)劃和系統(tǒng)的措施。,最佳變異條件(optimal conditions variance，

8、OCV) 是指在儀器、試劑和實(shí)驗(yàn)操作者等可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素均處于最佳時(shí)，連續(xù)測(cè)定同一濃度同一批號(hào)質(zhì)控物20批次以上，即可得到一組質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，經(jīng)計(jì)算可得到其均值( )、標(biāo)準(zhǔn)差(s)和變異系數(shù)（CV），此CV即為OCV。,常規(guī)條件變異(routine conditions variance，RCV) 是指在儀器、試劑和實(shí)驗(yàn)操作者等可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素均處于通常的實(shí)驗(yàn)條件下時(shí)，連續(xù)測(cè)定同一濃度同一批號(hào)質(zhì)控物20批次以上，即可得到

9、一組質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，經(jīng)計(jì)算可得到其均值( )、標(biāo)準(zhǔn)差(s)和變異系數(shù)（CV），此批間CV即為RCV。,質(zhì)控品（quality testing materisls）　 又稱質(zhì)控物，是指含量已知并處于與實(shí)際標(biāo)本相同的基質(zhì)當(dāng)中特性明確的物質(zhì)，這種物質(zhì)通常與其他雜質(zhì)混在一起，故質(zhì)控品必須按患者標(biāo)本一樣對(duì)待進(jìn)行檢測(cè)。 1、室內(nèi)質(zhì)控品：用于臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本檢測(cè)誤差的控制 2、室間質(zhì)評(píng)樣本： 評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)測(cè)定的準(zhǔn)確度 3、

10、質(zhì)控血清盤：用于特定的定性免疫測(cè)定試劑盒的評(píng)價(jià),第二節(jié) 免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制的特殊性,免疫學(xué)檢驗(yàn)方法的種類較多，其測(cè)定方法的靈敏度和特異性要比生化方法高得多，因此進(jìn)行質(zhì)量控制的手段不能照搬生化模式。免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制包括定量、半定量和定性免疫檢驗(yàn)三種類型。,標(biāo)準(zhǔn)品（standard） 指含量明確的處于一定基質(zhì)中其特性明確的物質(zhì)，通常用于比較檢測(cè)未知的物質(zhì)或成分。標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量的優(yōu)劣 直接影響樣品的測(cè)定結(jié)果。,一、標(biāo)準(zhǔn)品,（一

11、）標(biāo)準(zhǔn)品的概念和分類,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品性質(zhì)的差異，可分為三級(jí)：,,一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品,,二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品,,三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品,為凍干品，內(nèi)含載體蛋白，數(shù)量有限，可使用10~20年。通常為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，由WHO指定的實(shí)驗(yàn)室制備,即國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，是由國(guó)家的有關(guān)權(quán)威機(jī)構(gòu)制備，供國(guó)家內(nèi)部使用，其效價(jià)單位與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品一致,由二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品的比對(duì)而來(lái)的，通常由實(shí)驗(yàn)室自己或試劑生產(chǎn)廠家制備。,免疫學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)控常用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品,（二）理想標(biāo)準(zhǔn)品的基本條件,,,在規(guī)定保存條件下具有良好的穩(wěn)定

12、性,通常為含蛋白質(zhì)的緩沖液，對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯影響。,無(wú)已知傳染危險(xiǎn)性，對(duì)已知的血液傳播病原體必須做滅活處理。,標(biāo)準(zhǔn)品的基本條件,標(biāo)準(zhǔn)品濃度在方法的測(cè)定范圍即可。,標(biāo)準(zhǔn)品濃度在方法的測(cè)定范圍即可。,定量免疫檢驗(yàn)通常需要使用全自動(dòng)免疫分析儀，在測(cè)定時(shí)須用校準(zhǔn)品對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)。室內(nèi)質(zhì)控則應(yīng)選擇特定試劑盒或方法的測(cè)定范圍內(nèi)的高、中和低三種濃度的質(zhì)控品， 以監(jiān)測(cè)不同濃度標(biāo)本測(cè)定結(jié)果的變化。,二、定量、半定量和定性免疫檢驗(yàn),（一）定量免疫檢驗(yàn),

13、半定量實(shí)驗(yàn)在免疫檢驗(yàn)中比較少用，此類實(shí)驗(yàn)主要有酶免疫試驗(yàn)、熒光免疫試驗(yàn)等，測(cè)定結(jié)果通常以抗體的滴度、效價(jià)等表示。半定量免疫檢驗(yàn)質(zhì)控要點(diǎn)在于在有陰性質(zhì)控的前提下，采用多個(gè)相應(yīng)滴度或效價(jià)的抗體作為室內(nèi)質(zhì)控品，與臨床標(biāo)本同時(shí)測(cè)定。,（二）半定量免疫檢驗(yàn),定性免疫檢驗(yàn)是免疫學(xué)檢驗(yàn)的重點(diǎn)，其測(cè)定方法有很多，常以“有”或“無(wú)”也即“陽(yáng)性”或“陰性”來(lái)表達(dá)測(cè)定結(jié)果。定性測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控要點(diǎn)是控制測(cè)定下限，設(shè)置臨界cutoff值（CO值）的低值弱陽(yáng)

14、性質(zhì)控物是定性室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)鍵。應(yīng)選擇靶抗原或抗體濃度接近試劑盒或方法的測(cè)定下限的質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，并與臨床標(biāo)本的測(cè)定同時(shí)進(jìn)行，這一點(diǎn)對(duì)于使用肉眼判定測(cè)定結(jié)果的方法尤為重要,（三）定性實(shí)驗(yàn),三、檢測(cè)試劑的批間差異,,,不同廠家,不同批號(hào),產(chǎn)品的質(zhì)量、技術(shù)含量的區(qū)別,原料來(lái)源、純度不同以及生產(chǎn)條件變動(dòng),利用可靠的定值血清對(duì)購(gòu)入的試劑盒進(jìn)行性能檢測(cè)和批間差異評(píng)價(jià)，只有質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)質(zhì)量要求的試劑盒方可用于臨床實(shí)際檢測(cè)工作。,,地區(qū)儲(chǔ)

15、存、運(yùn)輸條件不同,,,同一批號(hào),引起試劑盒批間變異原因是多方面的： 1、試劑盒的原材料是依靠生物工程技術(shù)生產(chǎn)的， 生產(chǎn)技術(shù)要求難度大，工藝提純方法不好掌握， 質(zhì)量控制要求較高，產(chǎn)品質(zhì)量不易穩(wěn)定，使每批原材料的純度和活性都有所差別； 2、用不同的提純方法及不同批號(hào)的抗原或抗體所制備的試劑質(zhì)量不一樣； 3、同一批號(hào)的原料， 不同組裝工藝， 其結(jié)果也不盡一樣； 4、組裝工藝相同， 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制稍有欠缺， 其結(jié)

16、果也會(huì)有所差異。,,生產(chǎn)技術(shù)難度大,質(zhì)量控制要求較高,,,,,每批原材料的純度和活性都有所差別,引起試劑盒批間變異原因是多方面的,,提純方法不好掌握,產(chǎn)品質(zhì)量不易穩(wěn)定,四、檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性,穩(wěn)定性是體外檢測(cè)診斷試劑隨時(shí)間推移保持特性一致性的能力，是試劑必須具有的基本屬性，是確保體外檢測(cè)診斷試劑使用過(guò)程中安全有效的重要指標(biāo)。檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性研究的類型一般分為保存期穩(wěn)定性研究、使用期穩(wěn)定性研究及運(yùn)輸模擬研究。,保存期穩(wěn)定性研究主要用于確

17、定體外診斷試劑在規(guī)定的保存條件下最終包裝內(nèi)的有效期，一般至少使用3批產(chǎn)品建立保存期要求。使用期穩(wěn)定性研究是指產(chǎn)品投入使用后產(chǎn)品保持活性的時(shí)間段，可以使用單一產(chǎn)品批號(hào)建立此類保存期要求。,運(yùn)輸模擬研究是將樣本暴露于預(yù)先設(shè)定的改變的環(huán)境條件下用于模擬產(chǎn)品在到達(dá)消費(fèi)者前的過(guò)程中所能忍受的最壞的環(huán)境條件，此研究結(jié)果用于確定檢測(cè)試劑最適宜的運(yùn)輸和保存條件，要求檢測(cè)試劑至少有1個(gè)產(chǎn)品批號(hào)通過(guò)這種測(cè)試。目前歐盟有關(guān)體外檢測(cè)診斷試劑的法規(guī)規(guī)定：

18、 對(duì)于長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究，應(yīng)采用3個(gè)批次產(chǎn)品； 對(duì)于模擬運(yùn)輸條件下的穩(wěn)定性研究，可采用1個(gè)批次產(chǎn)品； 對(duì)于延長(zhǎng)保存期限的穩(wěn)定性研究，應(yīng)采用3個(gè)批次產(chǎn)品； 對(duì)于可能影響穩(wěn)定性的變更，可采用1個(gè)批次的產(chǎn)品。,由于所用的儀器種類繁多，試劑盒品牌不一，實(shí)驗(yàn)室工作人員業(yè)務(wù)能力的差異等，造成不同實(shí)驗(yàn)室間的測(cè)定結(jié)果差異較大。,臨床免疫檢驗(yàn)試劑盒保質(zhì)期一般為6個(gè)月以上，有些檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)為了節(jié)約成本，分?jǐn)?shù)次使用試劑盒，勢(shì)必會(huì)使酶標(biāo)抗原處于

19、溶解狀態(tài)，影響試驗(yàn)結(jié)果。 試劑盒抗體儲(chǔ)存容器應(yīng)由不吸附蛋白質(zhì)的材料制成抗體濃度越高（濃度大于10mg/ml），越穩(wěn)定，易保存；濃度低時(shí)，應(yīng)加0.1%~1.5%的牛血清白蛋白作保護(hù)劑。酶標(biāo)記抗體在應(yīng)用防腐劑時(shí)要注意不能用NaN3?？贵w濃縮液應(yīng)在-20℃保存，避免反復(fù)凍融。,35,第三節(jié) 免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)常用評(píng)價(jià)指標(biāo),臨床上實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)檢驗(yàn)的方法越來(lái)越多，如何對(duì)各種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行對(duì)比，以評(píng)價(jià)各種檢測(cè)方法的優(yōu)劣，這需要通過(guò)一些有效的評(píng)價(jià)指

20、標(biāo)來(lái)鑒定。,,診斷敏感性（sensitivity of diagnosis） 是指將實(shí)際患病者正確判斷為真陽(yáng)性的百分率，該指標(biāo)值越大，則漏檢的可能性愈小。,一、診斷敏感性、特異性和正確診斷指數(shù),,本指標(biāo)可用于評(píng)價(jià)測(cè)定方法的臨床應(yīng)用價(jià)值，理想測(cè)定方法的診斷敏感性為100%。,診斷特異性（specificity of diagnosis） 是指將實(shí)際無(wú)病者正確判斷為真陰性的百分率，該指標(biāo)值越大，則誤診的可能性越小。,,本

21、指標(biāo)是用于評(píng)價(jià)測(cè)定方法的臨床應(yīng)用價(jià)值，理想測(cè)定方法的診斷特異性應(yīng)為100%。,正確診斷指數(shù)（Youden index） 又稱約登指數(shù)，是指比較兩個(gè)試驗(yàn)方法時(shí)，單獨(dú)使用靈敏性或特異性，可能會(huì)出現(xiàn)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方法的靈敏度高、特異性低；另一個(gè)試驗(yàn)方法的靈敏度低、特異性高，從而提出靈敏性和特異性之和減去1，大小范圍從0到1,正確診斷指數(shù)愈大，實(shí)驗(yàn)的真實(shí)性亦愈好 理想實(shí)驗(yàn)方法的正確診斷指數(shù)為1。,診斷效率 （efficiency of d

22、iagnosis） 診斷效率是指能準(zhǔn)確區(qū)分患者和非患者的能力。理想測(cè)定方法的診斷效率應(yīng)為100%。其計(jì)算公式為：,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（positive predictive value, PPV） 指特定試驗(yàn)方法測(cè)定得到的陽(yáng)性結(jié)果中真陽(yáng)性的比率。理想測(cè)定方法的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值應(yīng)為100%，亦即沒(méi)有假陽(yáng)性。 陰性預(yù)示值（negative predictive value, NPV） 指特定試驗(yàn)方法測(cè)定得到的陰性結(jié)果中真陰性的比率。理想測(cè)定

23、方法的陰性預(yù)示值應(yīng)為100%，亦即沒(méi)有假陰性。,Cutoff值即臨界值，是指被檢測(cè)分析物的量值，用于確定結(jié)果高于還是低于臨床或分析的決斷點(diǎn)。對(duì)于大多數(shù)免疫分析來(lái)說(shuō)，來(lái)自感染和非感染人群的標(biāo)本之間有一個(gè)檢測(cè)結(jié)果的重疊區(qū)，這就說(shuō)明一個(gè)實(shí)驗(yàn)方法一般不大可能有100%完全的敏感性、特異性或預(yù)測(cè)值。因此，在選則Cutoff 值和報(bào)告檢測(cè)結(jié)果時(shí)應(yīng)該考慮哪個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)更重要 。 選擇Cutoff值和報(bào)告檢測(cè)結(jié)果時(shí)應(yīng)該考慮敏感性和特異性哪個(gè)更重要。理

24、想的Cutoff值是實(shí)驗(yàn)室自己在的人群中確定。,二、Cutoff值,,大多數(shù)免疫分析，來(lái)自感染和非感染人群的標(biāo)本之間有一個(gè)檢測(cè)結(jié)果的重疊區(qū)，即“灰區(qū)”,通過(guò)陰性血清測(cè)定結(jié)果均值: 使用陰性血清測(cè)定結(jié)果均值的2或3倍作為陽(yáng)性判斷值。使用正常人血清樣本的均值和標(biāo)準(zhǔn)差: 測(cè)定大量正常人血清樣本，然后將所得到的吸光度均值增加2或3個(gè)SD作為陽(yáng)性判斷值。通過(guò)大量正常人血清樣本和陽(yáng)性血清樣本: 在測(cè)定大量正常人血清樣本的同時(shí)，測(cè)定大量陽(yáng)性血清樣

25、本，根據(jù)測(cè)定值為正態(tài)分布確定。通過(guò)測(cè)定轉(zhuǎn)化型血清樣本: 在③的基礎(chǔ)上加測(cè)轉(zhuǎn)化型血清樣本，取假陽(yáng)性和假陰性發(fā)生率最低，且能區(qū)別抗原轉(zhuǎn)化至抗體出現(xiàn)點(diǎn)的吸光度值作為陽(yáng)性判斷值。通過(guò)ROC曲線: ROC曲線上在患病率接近50%時(shí)，最接近左上角的那一點(diǎn)，可定為Cutoff值。,Cutoff值的確定,,ROC曲線 是以靈敏度為縱坐標(biāo)，假陽(yáng)性率（1-特異度）為橫坐標(biāo)繪制所得的曲線，又稱受試者操作特性曲線。,ROC曲線在Cutoff值中的應(yīng)用,應(yīng)

26、用 ROC曲線不僅可用于不同檢驗(yàn)方法之間的比較，而且可用于對(duì)檢驗(yàn)項(xiàng)目臨床準(zhǔn)確性的評(píng)價(jià)以及決定正常和異常的分界點(diǎn)（即Cutoff值）。 意義 它表示靈敏度與特異度之間的相互關(guān)系，若在患病率接近50%時(shí)，最接近左上角的那一點(diǎn)，可定為Cutoff值，其假陽(yáng)性率和假陰性率之和最小。,第四節(jié) 室內(nèi)質(zhì)量控制,,室內(nèi)質(zhì)量控制（internal quality control，IQC）　由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)

27、本實(shí)驗(yàn)室從收取樣本至獲得測(cè)定結(jié)果，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析的整個(gè)測(cè)定過(guò)程可靠性程度的措施。旨在監(jiān)測(cè)和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。,一、室內(nèi)質(zhì)量控制系統(tǒng)的要求,（一）確定分析方法,可靠性 方法具有良好的特異性、靈敏性、穩(wěn)定性。實(shí)用性 檢測(cè)快速、微量、技術(shù)要求不高、影響因素易控制。,（二）建立標(biāo)準(zhǔn)化操作及流程,免疫測(cè)定影響因素 試劑準(zhǔn)備

28、、加樣、溫育、洗板、顯色和測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP文件） 儀器使用和維護(hù)、分析項(xiàng)目操作手冊(cè)、質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品的使用、實(shí)驗(yàn)室工作流程。,（三）儀器的校準(zhǔn)和校準(zhǔn)驗(yàn)證,儀器、試劑盒和檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)試和調(diào)整 校準(zhǔn)檢測(cè)程序和靶物質(zhì)之間的關(guān)系使用校準(zhǔn)品按照日常檢測(cè)標(biāo)本程序測(cè)定 驗(yàn)證儀器、試劑盒及檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果日常所用的器材的校準(zhǔn) 溫箱、水浴箱、冰箱、微量加樣器、標(biāo)準(zhǔn)滴管等,（四）標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的使用,標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品是保證質(zhì)

29、控工作的重要物質(zhì)基礎(chǔ) 建立質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，常規(guī)工作基礎(chǔ)上評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確性 采用臨界值血清，連續(xù)測(cè)定20次，作質(zhì)控圖,（五）保證試劑質(zhì)量,不同檢測(cè)項(xiàng)目的試劑應(yīng)嚴(yán)格要求使用國(guó)家藥監(jiān)局正式批準(zhǔn)生產(chǎn)文號(hào)及衛(wèi)生部“批批檢”合格產(chǎn)品或同意進(jìn)口的試劑盒 對(duì)所有的試劑品牌、規(guī)格、批號(hào)、效期作記錄，以備質(zhì)量評(píng)價(jià)。,（六）實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境、設(shè)施及設(shè)備,充分的空間、良好的照明和空調(diào)設(shè)備 使實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備保養(yǎng)良好，定期校準(zhǔn) 1、極

30、易出現(xiàn)問(wèn)題的區(qū)域，如探針、洗滌區(qū) 2、洗板機(jī)注意加注洗液的探針孔堵塞問(wèn)題及液體吸 加的有效性 3、ELISA測(cè)定孔的非特異性顯色問(wèn)題等,二、常用的免疫學(xué)統(tǒng)計(jì)質(zhì)控圖,（一）室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義,質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式 質(zhì)控規(guī)則以符號(hào)AL來(lái)表示，其中A為質(zhì)控測(cè)定中超出質(zhì)量控制限的測(cè)定值的個(gè)數(shù)，L為控制限，通常 用 或 ±1~3s來(lái)表示。當(dāng)質(zhì)控測(cè)定值超出控制限L時(shí)，即可將該批測(cè)定判定為失控。例

31、如常用的l3s質(zhì)控規(guī)則，其中l(wèi)為原式中的A，3s為原式中的的L，其確切的含義為：在質(zhì)控測(cè)定值中，如果有一個(gè)測(cè)定值超出±3s的范圍，即可將該批次判定為失控。,質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及定義,（二）常用質(zhì)控圖的選擇、繪制及結(jié)果判斷,Levey-Jennings質(zhì)控圖法 基本特點(diǎn)是： ① 根據(jù)均值（ ）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）確定質(zhì)控限，以 ±2s為告警限， ±3s為失控限判斷質(zhì)控結(jié)果 ② 對(duì)

32、待質(zhì)控品應(yīng)如同病人標(biāo)本一樣同等對(duì)待，不能進(jìn)行特殊處理 ③ 當(dāng)使用一個(gè)以上濃度的質(zhì)控品想在同一張質(zhì)控圖描點(diǎn)時(shí)，則質(zhì)控 圖上的 和s可不標(biāo)數(shù)據(jù)，而僅以 和s表示； ④若以 ±2s為失控限，假失控的概率太高，通常不能接受，以 ±3s為失控限，假失控的概率低，但誤差檢出能力不強(qiáng)。,Levey-Jennings質(zhì)控圖,Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方

33、法 該方法是將前述的多個(gè)質(zhì)控規(guī)則同時(shí)應(yīng)用進(jìn)行質(zhì)控判斷的方法。常用的有6個(gè)質(zhì)控規(guī)則，即12S、13s、22s、R4s、41s、10x,其中12S規(guī)則作為告警規(guī)則。通常上述規(guī)則中，13s和R4s規(guī)則反映的隨機(jī)誤差，而22s、41s和10x反映的是系統(tǒng)誤差，系統(tǒng)誤差超出一定的程度，也可從13s和R4s反映出來(lái)。,Westgard多規(guī)則常用質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)12S在控 可接受檢測(cè)結(jié)果13S22SR4S41S

34、10X失控 拒絕接受檢測(cè)結(jié)果,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,NO,NO,NO,NO,NO,YES,YES,YES,YES,YES,YES,NO,Westgard多規(guī)則質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)邏輯圖,“即刻法”質(zhì)控法 “即刻法”質(zhì)控方法的實(shí)質(zhì)是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，只要有連續(xù)3批質(zhì)控測(cè)定值，即可對(duì)第3次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體步驟是: （1)將質(zhì)控測(cè)定值從小到大排列，即x1、x2、x3、x4、x5、x6、……xn（x1為最小值

35、，xn為最大值）； （2)計(jì)算均值( )和標(biāo)準(zhǔn)差(s)； （3)按下述公式計(jì)算SI上限和SI下限值； （4）將SI上限和SI下限值與SI值表中的數(shù)值比較。,“即刻法”質(zhì)控SI值表,質(zhì)控結(jié)果的判斷：1、SI上限和SI下限值均小于n2s對(duì)應(yīng)的值時(shí)，測(cè)定值在2s之內(nèi)，屬“在控”。2、如SI上限和SI下限值中之一處于n2s 和n3s對(duì)應(yīng)的值之間時(shí)，測(cè)定值在2s～3s之間，處于“告警”狀態(tài)。3、當(dāng)SI上限和SI

36、下限值之一＞ n3s對(duì)應(yīng)的值時(shí)，測(cè)定值的變化已超出3s，屬“失控”。,三、失控處理程序,（一）常見(jiàn)的失控原因,1.測(cè)定操作中的隨機(jī)誤差，如標(biāo)本或試劑吸取的重復(fù)性差、試劑未混勻、洗滌不充分、溫育時(shí)間和環(huán)境條件的一致性不佳等，或吸量不準(zhǔn)；2.儀器故障或維護(hù)不良，如光路不潔、比色波長(zhǎng)不對(duì)、管道堵塞等；,3.試劑問(wèn)題，如標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品不對(duì)、變質(zhì)或失效，顯色底物變質(zhì)、試劑污染等；4.采用的質(zhì)控規(guī)則和控制限范圍不當(dāng)?shù)取?（二）查找失控原因的

37、步驟,1.回顧整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程，盡可能找到出問(wèn)題的環(huán)節(jié)；2.如未找到原因，重測(cè)同一質(zhì)控品，以排除人為誤差和尋找偶然誤差；3.如重測(cè)結(jié)果仍失控，打開(kāi)一瓶新的質(zhì)控品，重測(cè)失控項(xiàng)目，以排除質(zhì)控品變質(zhì)或過(guò)期；,4.如檢測(cè)結(jié)果仍不在控，進(jìn)行儀器檢查，如光源更換、比色杯清洗、儀器清洗或更換試劑等，維護(hù)后重測(cè)失控項(xiàng)目；5.更換新的校準(zhǔn)液重新校準(zhǔn)儀器，或更換操作人員，然后重測(cè)失控項(xiàng)目，以排除校準(zhǔn)液的原因；6.如仍未找到原因，聯(lián)系儀器或試劑生產(chǎn)廠

38、家，進(jìn)行技術(shù)支援。,第五節(jié) 室間質(zhì)量評(píng)價(jià),,室間質(zhì)量評(píng)價(jià)一般是由室間質(zhì)量評(píng)價(jià)組織者定期發(fā)放一定數(shù)量的統(tǒng)一的質(zhì)控樣本給各參加質(zhì)評(píng)實(shí)驗(yàn)室，然后實(shí)驗(yàn)室將測(cè)定結(jié)果在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)按照統(tǒng)一的格式報(bào)告至組織者進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，最后由組織者向每一參加實(shí)驗(yàn)室寄發(fā)室間質(zhì)評(píng)報(bào)告。,,室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（external quality assessment，EQA）　 是指為客觀地比較某一實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的方法，連續(xù)、客觀地

39、評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性。 是對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作和實(shí)驗(yàn)方法的回顧性價(jià)，是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量改進(jìn)的措施，而不是用來(lái)決定實(shí)時(shí)的測(cè)定結(jié)果的可接受性。,一、質(zhì)評(píng)的概念,能力驗(yàn)證試驗(yàn)（proficiency testing，PT）　 是指利用實(shí)驗(yàn)室間檢驗(yàn)來(lái)檢查實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)?zāi)芰Φ姆椒?。目的是利用?shí)驗(yàn)室間比對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果，檢查實(shí)驗(yàn)室整體檢驗(yàn)?zāi)芰?，評(píng)審各參與實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力。 PT試驗(yàn)是為評(píng)審

40、實(shí)驗(yàn)室時(shí)使用的一種評(píng)審方法，通過(guò)PT可提供該實(shí)驗(yàn)室具有得出可靠檢驗(yàn)結(jié)果能力的主要證據(jù)。,二、EQA和PT試驗(yàn)的區(qū)別及作用,EQA是指進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室之間的比對(duì)試驗(yàn)，而PT試驗(yàn)是利用EQA的結(jié)果，評(píng)審實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)能力。EQA的目的是多方面的，主要包括：評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室整體的檢驗(yàn)?zāi)芰?；評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室工作人員的個(gè)人檢驗(yàn)?zāi)芰?；確定檢驗(yàn)方法的精密度；確定某一樣品的準(zhǔn)確度；PT的目的僅是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室整體的檢驗(yàn)?zāi)芰Α?EQA 根據(jù)其目的可分為自我教育和執(zhí)業(yè)認(rèn)可兩大類

41、，前者以英國(guó)國(guó)家室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃NEQAs的EQA 為代表，后者則以美國(guó)CAP的PT試驗(yàn)為范本，二者的運(yùn)作模式基本相同。我國(guó)逐步利用EQA的實(shí)驗(yàn)室能力評(píng)價(jià)結(jié)果對(duì)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證、質(zhì)量改進(jìn)和實(shí)驗(yàn)室教育的措施，對(duì)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)中存在的問(wèn)題、證明現(xiàn)行實(shí)驗(yàn)方法的有效性、評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室工作人員的能力方面有積極意義。,三、EQA的方式、評(píng)分及意義,發(fā)放質(zhì)控品進(jìn)行調(diào)查 國(guó)內(nèi)外室間質(zhì)評(píng)的最常用的形式 臨檢中心--專業(yè)實(shí)驗(yàn)室--結(jié)果報(bào)中心—評(píng)價(jià)反饋實(shí)

42、驗(yàn)室 對(duì)質(zhì)控物進(jìn)行特殊對(duì)待，不能真實(shí)反映工作水平現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查 事先不通知，臨時(shí)派觀察員到實(shí)驗(yàn)室 容易發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室存在的實(shí)際問(wèn)題，多用于專項(xiàng)調(diào)查或EQA成績(jī)不合格的實(shí)地調(diào)查,（一）EQA的方式,（二）EQA的評(píng)分方法,陰性或陽(yáng)性型質(zhì)評(píng)評(píng)分 1.計(jì)分 主要用于定性測(cè)定室間質(zhì)評(píng)，根據(jù)S/co判陰性或陽(yáng)性： 測(cè)定結(jié)果與預(yù)期結(jié)果相符，得2分 測(cè)定結(jié)果與預(yù)期結(jié)果不符，得0分 凡報(bào)可疑結(jié)果者得1分 2.評(píng)價(jià)

43、 SI≥0為合格，成績(jī)居于全國(guó)平均水平之上； SI＜0為不合格，成績(jī)居于全國(guó)平均水平之下。,數(shù)字型質(zhì)評(píng)評(píng)分 1.計(jì)分 主要用于定量測(cè)定室間質(zhì)評(píng)，直接以測(cè)定值計(jì)算SI： 2.評(píng)價(jià) SI趨于0時(shí)，優(yōu)秀，檢測(cè)值接近全國(guó)預(yù)期值(靶值)。 SI≤1時(shí)，優(yōu)秀，測(cè)定值在全國(guó)檢測(cè)分布的1S范圍內(nèi)。 1＜SI≤2時(shí)，合格，在全國(guó)檢測(cè)分布的1S外、2S之內(nèi)范圍。 SI＞2時(shí)，不合格，說(shuō)明測(cè)定存在較大的

44、問(wèn)題。,（三）EQA的意義,1.評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室是否具有開(kāi)展相應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目的能力2.作為實(shí)驗(yàn)室外部措施，補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的質(zhì)量 控制程序3.增加患者和臨床醫(yī)生對(duì)實(shí)驗(yàn)室能力的信任度4.通過(guò)EQA，質(zhì)控物發(fā)放機(jī)構(gòu)可進(jìn)行項(xiàng)目方法學(xué)的 評(píng)價(jià),第六節(jié) 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制數(shù)據(jù) 的管理和信息系統(tǒng),,1.隨著計(jì)算機(jī)的發(fā)展及應(yīng)用普及，臨床實(shí)驗(yàn)室正逐步進(jìn)入到計(jì)算機(jī)管理時(shí)代2.大量實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)的保存，結(jié)果的推導(dǎo)計(jì)算，從標(biāo)本接收、檢測(cè)及

45、結(jié)果報(bào)告各個(gè)環(huán)節(jié)的實(shí)驗(yàn)記錄等等，均可通過(guò)計(jì)算機(jī)對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)一管理。 3.計(jì)算機(jī)管理的原始數(shù)據(jù)和記錄應(yīng)該建立一套有效的規(guī)章制度,一、質(zhì)量控制數(shù)據(jù)的管理,二、信息系統(tǒng)在免疫質(zhì)控管理中的應(yīng)用,實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（laboratory information management system, LIMS） 是指通過(guò)計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室各種信息進(jìn)行管理的計(jì)算機(jī)軟件和硬件系統(tǒng)，也就是將計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)技術(shù)與現(xiàn)代的管理思想有機(jī)結(jié)合，利用數(shù)

46、據(jù)處理技術(shù)、海量數(shù)據(jù)存儲(chǔ)技術(shù)、寬帶傳輸網(wǎng)絡(luò)技術(shù)、自動(dòng)化儀器分析技術(shù)，來(lái)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的信息管理和質(zhì)量控制等進(jìn)行全方位管理的計(jì)算機(jī)軟件和硬件系統(tǒng)，以滿足實(shí)驗(yàn)室管理上的各種目標(biāo)。,按照功能LIMS一般可分為兩大類：1.第一類是純數(shù)據(jù)管理型，其主要功能一般包括：數(shù)據(jù)采集、傳輸、存貯、處理、數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析、數(shù)據(jù)合格與否的自動(dòng)判定、輸出與發(fā)布、報(bào)表管理、網(wǎng)絡(luò)管理等模塊；2.第二類是實(shí)驗(yàn)室全面管理型，除具有第一類功能外，還增加了以下管理職能：樣品管理、

47、資源（材料、設(shè)備、備品備件、固定資產(chǎn)管理等）管理、事務(wù)（如工作量統(tǒng)計(jì)與工資獎(jiǎng)金管理、文件資料和檔案管理）管理等模塊，組成了一套完整的實(shí)驗(yàn)室綜合管理體系和檢驗(yàn)工作質(zhì)量監(jiān)控體系。,實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)的功能：1.試驗(yàn)記錄功能：包括儀器設(shè)備操作、維護(hù)和校準(zhǔn)，試劑的購(gòu)買、質(zhì)檢、保存和使用，實(shí)驗(yàn)室的清潔，人員的培訓(xùn)，室內(nèi)質(zhì)控及質(zhì)控圖，標(biāo)本的接收、處理、保存和檢測(cè)，結(jié)果計(jì)算及報(bào)告等記錄表格及歸類；2.信息分級(jí)管理功能：實(shí)驗(yàn)室信息權(quán)限分級(jí)管理，即實(shí)

48、驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和普通實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員使用權(quán)限不同；3.硬件的管理功能：儀器設(shè)備的維護(hù)、校準(zhǔn)和使用建立管理體系；儀器測(cè)定數(shù)據(jù)應(yīng)建立數(shù)據(jù)分析軟件，與報(bào)告系統(tǒng)有機(jī)聯(lián)系起來(lái)。,學(xué) 習(xí) 小 結(jié),1．免疫學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)控的有關(guān)概念： 準(zhǔn)確度、精密度、偏倚、均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)、正態(tài)分布、質(zhì)量保證、室內(nèi)質(zhì)量控制、最佳條件變異、常規(guī)條件變異、標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、診斷敏感性、診斷特異性、正確診斷指數(shù)、診斷效率、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、Cutof

49、f 值、ROC曲線、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)、能力驗(yàn)證試驗(yàn)、LIMS系統(tǒng),2．確定Cutoff值的常用的主要方法有： ①通過(guò)陰性血清測(cè)定結(jié)果均值； ②使用正常人血清樣本的均值和標(biāo)準(zhǔn)差； ③通過(guò)大量正常人血清樣本和陽(yáng)性血清樣本； ④通過(guò)測(cè)定轉(zhuǎn)化型血清樣本； ⑤通過(guò)ROC曲線。,3．常用的免疫學(xué)統(tǒng)計(jì)質(zhì)控圖：①Levey-Jennings質(zhì)控圖法；②Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法；③“即刻法”質(zhì)控法。,4．EQA的方式、評(píng)分和意

50、義：（1）方式：①發(fā)放質(zhì)控品進(jìn)行調(diào)查；②現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查。（2）評(píng)分：①陰性或陽(yáng)性型質(zhì)評(píng)評(píng)分，SI≥0為合格，居全國(guó)平均水平之上；SI＜0為不合格，居全國(guó)平均水平之下；②數(shù)字型質(zhì)評(píng)評(píng)分，當(dāng)SI趨于0時(shí)，檢測(cè)值接近全國(guó)預(yù)期值(靶值)，當(dāng)SI≤1時(shí)，測(cè)定值在全國(guó)檢測(cè)分布的1S范圍內(nèi)，當(dāng)1＜SI≤2時(shí)，測(cè)定值在全國(guó)檢測(cè)值分布的1S之外，2S之內(nèi)的范圍。SI＞2，為不合格，說(shuō)明測(cè)定存在較大的問(wèn)題。（3）意義: ①評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室是否具有開(kāi)展相應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目