光合細(xì)菌的菌種分離和菌種保存技術(shù)

1、4光合細(xì)菌的菌種分離和菌種保存技術(shù)光合細(xì)菌的菌種分離和菌種保存技術(shù)菌種的分離，是從它生活的環(huán)境中，與混雜的微生物群分離出來。這是獲得優(yōu)良菌株最基本且必要的手段。菌種大量培養(yǎng)菌種大量培養(yǎng)目前應(yīng)用於有機(jī)廢水淨(jìng)化和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上的光合細(xì)菌，主要是紅螺菌科中稱為紫色非硫細(xì)菌中的一些種類，包括紅螺菌屬（Rhodosirillum）、紅假單胞菌屬（Rhodopseudomonas）、和紅微菌屬（Rhodomicrobium）在內(nèi)的三個(gè)屬，共同特徵是具

2、鞭毛有運(yùn)動(dòng)性，不產(chǎn)生氣泡，細(xì)胞內(nèi)不積累硫化物。採樣：採樣：光合細(xì)菌生長條件，主要有水、有機(jī)質(zhì)和厭氧環(huán)境。因此，在河底、海底的泥土及水田、溝渠等經(jīng)常含有有機(jī)物的泥土上，有著呈橙黃色、粉紅色塊狀沉積物的泥土，都可以採取分離光合細(xì)菌的樣品。培養(yǎng)方式：培養(yǎng)方式：目前在水產(chǎn)養(yǎng)殖上應(yīng)用的光合細(xì)菌，主要是光合異營型紅螺菌科，其中以紅假單胞菌屬（Rhodopseudomonas）為主。採用的養(yǎng)殖方法有兩種，全封閉的厭氣光照培養(yǎng)方式，開放式的微氣光照培養(yǎng)

3、方式。全封閉式的厭氣光照培養(yǎng)採用無色透光的容器，消毒後裝入培養(yǎng)液，接入20~50%的菌種母液，將容器中灌滿培養(yǎng)液，加蓋造成厭氣的培養(yǎng)環(huán)境。，置於有陽光的地方或用人工光源進(jìn)行培養(yǎng)，達(dá)到指數(shù)生長期高峰時(shí)，可作為菌種器液接種。開放試微氣光照培養(yǎng)可採用100200L容量的的塑膠桶或500L容量的豐年蝦孵化桶為培養(yǎng)容器。在底部裝打氣石，培養(yǎng)時(shí)微充氣，使桶內(nèi)光合細(xì)菌上下緩緩翻動(dòng)。在桶的正上方約30cm左右加裝人工光源，使液面照度達(dá)2000lux。容

4、器消毒後裝入培養(yǎng)液，接入20~50%的菌種母液，照明，微充氣培養(yǎng)。培養(yǎng)基培養(yǎng)基對(duì)培養(yǎng)光合自營型細(xì)菌，一般用無機(jī)鹽為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入適量的碳酸氫鹽作為二氧化碳的來源，用磷酸調(diào)整pH7.0~8.0，然後加入0.05~0.1%的Na2S9H2O作為電子供體和供氫體，在光照厭氣環(huán)境，20~30℃培養(yǎng)。培養(yǎng)光合異營型的細(xì)菌則需在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中再加入0.2%酵母膏、0.25%乙酸鈉、0.02%丙酸鈉和5%NaHCO3，調(diào)整其pH至7.08.0，根據(jù)

5、環(huán)境需求而定。紅螺菌科配方紅螺菌科配方滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉澱砂濾後的水用漂白液消毒後使用。培養(yǎng)基配製根據(jù)所培養(yǎng)種類的營養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量，逐一溶解，混合，配成培養(yǎng)基。也可先配成母液，使用時(shí)按比例加入一定的量即可。接種培養(yǎng)基配好後，應(yīng)立即進(jìn)行接種。光合細(xì)菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的接種量需求較高，一般為20％～50％，即菌種母液量和新配培養(yǎng)液雖之比為1

6、：4～1：1，不應(yīng)低於20％，尤其是微氣培養(yǎng)，接種量更應(yīng)高些，否則光合細(xì)菌在培養(yǎng)液中很難佔(zhàn)絕對(duì)優(yōu)勢，影響最終產(chǎn)量和質(zhì)量。培養(yǎng)管理光合細(xì)菌的培養(yǎng)過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問題的分析處理等三個(gè)方面。日常管理和測試攪拌和打氣：光合細(xì)菌培養(yǎng)過程中必須幫助沉澱的光合細(xì)菌上浮獲得光照，保持菌細(xì)胞的良好生長。大型厭氣培養(yǎng)則用機(jī)械攪拌或使用小型沉水馬達(dá)使水緩慢循環(huán)，保持菌體懸浮。微氣培養(yǎng)是通過打氣幫助菌體上浮，

7、因?yàn)榇驓鈺?huì)使溶氧含量增加，光合細(xì)菌繁殖受到抑制，所以必須嚴(yán)格控制供氣量。一般採用定時(shí)斷續(xù)充氣，充氣量控制在1～1.5L／（Lhr）之間，溶解氧量保持在1ppm以下。調(diào)節(jié)光照度：培養(yǎng)光合細(xì)菌需要連續(xù)進(jìn)行照明。白天可利用日光培養(yǎng)，晚上則使用人工光源，或完全利用人工光源培養(yǎng)。一般培養(yǎng)光照強(qiáng)度應(yīng)控制在2000～5000lx之間。如果光合細(xì)菌細(xì)胞密度高，則光照強(qiáng)度應(yīng)提高到5000～10000lx。調(diào)節(jié)溫度：光合細(xì)菌對(duì)溫度的適應(yīng)範(fàn)圍在23～39℃內(nèi)

8、，均能正常生長繁殖，可不必調(diào)整溫度。常溫下培養(yǎng)也可通過調(diào)整，將溫度控制在光合細(xì)菌生長繁殖最適宜的範(fàn)圍。酸鹼度的測定和調(diào)整：培養(yǎng)光合細(xì)菌必須注意酸鹼度的變化。光合細(xì)菌大量繁殖時(shí)，菌液pH值上升，此時(shí)為指數(shù)生長期。但當(dāng)pH值超過生長的適應(yīng)範(fàn)圍時(shí)，光合細(xì)菌生長下降。如果能及時(shí)調(diào)整，使pH值保持在最適範(fàn)圍，則光合細(xì)菌能繼續(xù)生長繁殖。測定和調(diào)整pH值，可以讓光合細(xì)菌保持在指數(shù)生長期。一般採用加酸的辦法來降低酸鹼值。醋酸、乳酸和鹽酸均可使用，最常用