菌種保藏方法

1、菌種保藏方法菌種保藏方法中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心微生物菌種保藏對(duì)于微生物菌種的研究和利用至關(guān)重要。以下是中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心整理的目前國(guó)際國(guó)內(nèi)常用的菌種保藏方法，包括：定期移植法定期移植法、液體石蠟液體石蠟法、沙土管法沙土管法、真空冷凍干燥法真空冷凍干燥法、80℃冰箱凍結(jié)法冰箱凍結(jié)法、液氮超低溫凍結(jié)法、固體曲保藏法、液氮超低溫凍結(jié)法、固體曲保藏法、蒸餾水保藏法蒸餾水保藏法，各種菌種保藏方法都有詳細(xì)的步驟說明。定期移植法定

2、期移植法亦稱傳代培養(yǎng)保藏法，包括斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、液體培養(yǎng)等。是指將菌種接種于適宜的培養(yǎng)基中，最適條件下培養(yǎng)，待生長(zhǎng)充分后，于4～6℃進(jìn)行保存并間隔一定時(shí)間進(jìn)行移植培養(yǎng)的菌種保藏方法。操作步驟如下：1培養(yǎng)基制備1.1器皿準(zhǔn)備培養(yǎng)基制備過程中所用的一些玻璃器皿，如三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、燒杯、吸管等，經(jīng)洗滌、干燥、包裝、滅菌后使用。1.2溶解培養(yǎng)基配料先在燒杯中放適量水，按培養(yǎng)基配方稱取各項(xiàng)材料，依次將緩沖化合物、主要元素、微量元素、維生

3、素等材料加入水中溶解，最后加足水量，攪拌均勻。1.3調(diào)pH值配料溶解后將培養(yǎng)基冷卻至室溫，根據(jù)要求加稀酸（0.1molL鹽酸）或稀堿(10%氫氧化鈉)調(diào)pH值。加酸或堿液時(shí)要緩慢、少量、多次攪拌，防止局部過堿或過酸而導(dǎo)致測(cè)量不準(zhǔn)確和營(yíng)養(yǎng)成分被破壞。1.4加凝固劑配制固體培養(yǎng)基時(shí)需加凝固劑，如瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養(yǎng)基中，加熱并不從斜面底部自下而上劃密“之”字形線。能充分利用斜面獲得大量菌體細(xì)胞，適用于細(xì)菌和酵母菌等。2.1.5

4、挖塊接種法挖取菌絲體連同少量培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接到新鮮斜面上。適用靈芝等擔(dān)子菌類真菌。2.2穿刺接種用接種針從原菌種斜面上挑取少量菌體，從柱狀培養(yǎng)基中心自上而下刺入，直到接近管底（勿穿到管底），然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針。適用于細(xì)菌和酵母菌等。2.3液體接種挑取少量固體斜面菌種或用無(wú)菌滴管等吸取原菌液接種于新鮮液體培養(yǎng)基中。3培養(yǎng)將接種后的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中，在適宜的條件下培養(yǎng)至細(xì)胞穩(wěn)定期或得到成熟孢子。細(xì)菌培養(yǎng)溫度一般為30～37℃，真菌

5、培養(yǎng)溫度一般為25～28℃。4保藏培養(yǎng)好的菌種于4～6℃保存，根據(jù)要求每3～6個(gè)月移植一次。某些菌種，如芽裂酵母，阿舒假囊酵母，棉病囊霉等，須1～3個(gè)月移植一次。保藏濕度用相對(duì)濕度表示，通常為50%～70%。斜面菌種應(yīng)保藏相繼三代培養(yǎng)物以便對(duì)照，防止因意外和污染造成損失。液體石蠟法液體石蠟法亦稱礦物油保藏法定期移植保藏法的輔助方法。是指將菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，最適條件下培養(yǎng)至菌種長(zhǎng)出健壯菌落后注入滅菌的液體石蠟，使其覆蓋整個(gè)斜面