淺談國內(nèi)菌種保藏材料和保藏方法

1、<p>　　淺談國內(nèi)菌種保藏材料和保藏方法</p><p>　　摘要：菌種保藏是為了保持菌種的生物活力，確保其不被污染，不發(fā)生生物變異，使其接近原始菌株的狀態(tài)。主要介紹了近年來我國菌種保藏的方法和保藏材料。 </p><p>　　關(guān)鍵詞：菌種保藏 保藏方法 保藏材料 </p><p>　　菌種是國家的重要資源，為了保證菌種在傳代過程中不發(fā)生變異，喪失其優(yōu)良

2、特性。因此，每個國家都十分重視菌種的保藏。菌種保藏是為了保持菌種的生物活力，確保其不被污染，不發(fā)生生物變異，使菌種在保藏的過程中力求其保有原始菌株的狀態(tài)。所以，探究菌種保藏方法和保藏材料對我國菌種保藏具有十分重要的意義。 </p><p>　　1、菌種保藏的原理 </p><p>　　菌種保藏技術(shù)的原理是利用微生物的生化特點，通過人工模擬，制造特殊的生存條件對菌種進行保藏，使微生物在保藏過

3、程中生物代謝處于停止或者嚴重不活潑狀態(tài)，抑制其生長和繁殖，使其處于休眠狀態(tài)，阻止菌種產(chǎn)生繁殖變異。通常采用的方法有干燥、降低培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分以及缺氧干燥等，使菌種在這些特殊環(huán)境中不發(fā)生變異，保持純種，從而達到保藏的目的。 </p><p><b>　　2、菌種保藏材料 </b></p><p>　?。?）名膠片菌種保藏材料。胡必勇等利用名膠片保藏法對1979年到198

4、8年分離的志賀菌和沙門菌的118株菌種的保藏效果。王紅也采用了該保藏材料對金黃色葡萄球菌以及綠膿桿菌進行了保藏觀察，通過五年的傳代鑒定，發(fā)現(xiàn)菌種的各項生化特征都沒有發(fā)生變異，也沒有發(fā)生丟失，并且菌種的存活率高達百分之百。由此得到，這種保藏方法不但操作簡單，不需要使用貴重的設(shè)備，并且能夠使菌種保存的時間長，這種保藏材料十分適合基層菌種保藏使用。 </p><p>　　相關(guān)人員于2007年6月進行名膠片干燥保存菌種法

5、試驗研究，選用的標(biāo)準(zhǔn)菌種是ATCC26003金黃色葡萄球菌。通過連續(xù)五年的觀察和鑒定，得到了以下試驗結(jié)果，如圖所示： </p><p>　　從表中可以得到，從2007年到2012年歷年傳代鑒定結(jié)果中可以得到菌種各項生化特征以及形態(tài)和原菌株沒有區(qū)別，菌種存活率為100%，這表明使用明膠片對菌種保存的效果比較好。 </p><p>　?。?）牛乳菌種保藏材料。為了得到更多的實用、操作簡便并且能

6、夠?qū)N長期保存的方法，為科研和教學(xué)提供標(biāo)準(zhǔn)的菌株。徐雅娟等將二十九種復(fù)蘇的細菌菌種接種在無細菌、無污染的新鮮牛乳中，將該培養(yǎng)基放在冷凍室中，保持零下二十度對其進行保存，定期對菌種進行復(fù)蘇鑒定。實驗結(jié)果顯示，在這種方式下，一次接種的這二十九種菌種能夠保存三年。在對菌種的形態(tài)、生化特性、存活情況、染色以及血清學(xué)試驗的分析結(jié)果中可以得到，這些檢測項的結(jié)果和菌種的各項原始鑒定結(jié)果沒有差別。由此可見，利用無菌鮮牛乳作為菌種保藏料具有良好的保藏效

7、果。使用該保藏材料不用特殊的實驗設(shè)備，也不需要反復(fù)傳代。 </p><p>　　（3）甘油菌種保藏材料。在菌種保藏中，最常用的保藏材料就是甘油。鐘志宏等人為了尋找到一種適合保藏實驗室使用菌種的簡便方法，對甘油原液保存菌種的方法實施了改良措施。他們將普通菌種進行純化，并將純化后的菌種接種在肉湯管中，增菌時間為6小時，然后向試管中加入定量的生理鹽水--甘油保存液，將試管放置在零下二十度的冷藏室中進行保存；將奈瑟氏菌屬

8、和鏈球菌屬進過純化以后接種在加有血清的肉湯管，將試管置于含量為5%-10%的二氧化碳環(huán)境中增菌10小時，然后向其中加入適量的保存液，放置在零下八十度的環(huán)境中保存；將真菌菌種進行純化，然后直接取菌洗入肉湯，不做增菌培養(yǎng)，在試管中加入保存液，放置在零下二十度的環(huán)境中保存。對上訴三種保藏方法進行為期3年的試驗觀察，結(jié)果表明，各個菌種均取得了良好的保存效果，菌種的染色特性、形態(tài)結(jié)構(gòu)以及菌種的生化反應(yīng)等和標(biāo)準(zhǔn)株的各項指標(biāo)一致。該實驗結(jié)果認為利用生

9、理鹽水--甘油保存方法對菌種進行保存能夠使其保存的時間較長，尤其是針對奈瑟氏菌屬和鏈球菌屬等這些需要特殊保存法進行保存的菌種，也能夠用這種保存材料在普通的實驗室進行保存。 </p><p><b>　　3、菌種保藏方法 </b></p><p>　?。?）真空干燥冷凍保藏法。該保藏方法是將成熟階段的微生物培養(yǎng)基以懸浮狀態(tài)置于保護劑中，制成濃菌液，保護劑可以是卵白、無菌

10、血清、海藻糖或者脫脂牛奶。將濃菌液分裝在若干安瓿瓶中，將安瓿瓶放置在冰箱中開始冷凍，當(dāng)菌液的溫度達到了設(shè)定溫度以后，再對其進行干燥處理，最后將安瓿瓶置于真空條件中將安瓿瓶熔封，并置于零下二十度的環(huán)境中保存。 </p><p>　　這種方法對減少菌種死亡、基因突變以及泄露等有十分高效的作用，尤其是對一些有高致病性菌種的保存，該方法的效果非常好，也是目前最有效的方法。但是該方法也具有一些缺點，使用該方法保藏菌種，操作

11、復(fù)雜，需要抽真空、冷凍干燥等。 </p><p>　?。?）加入保護劑的冷凍保藏法。最常見的是加入甘油保護劑，將菌種培養(yǎng)物制成懸濁液封存在試管中，將試管放置在干冰、液氮或者零下二十度的冷藏室中冷凍保藏。另外也可以用無菌鮮牛奶作為菌種保藏劑。將菌種進行純化，使用接種環(huán)將純化后的菌種接種在含有無菌鮮牛奶的試管中，將試管置于真空環(huán)境下熔封，并置于零下四度的冰箱中保藏。 </p><p>　?。?

12、）人工傳代和超低溫保藏技術(shù)。為了達到保藏菌種的目的，使菌種自分離時就保持不變的優(yōu)良特性，為人類研究和生產(chǎn)提供優(yōu)良的菌種。馬洪波等人研究了菌種保藏的原理并探討了菌種的復(fù)蘇技術(shù)。菌種保存的方法主要有液氮保存法、冷凍干燥保存法、傳代培養(yǎng)保存法、超低溫保存法等。在實驗室中，經(jīng)常用到的就是冷凍保存法，采用的保藏材料就是生理鹽水--甘油液保存。通過對超低溫保藏菌種和人工傳代培養(yǎng)菌種的保藏效果進行對比和分析，研究人員得到：對于抵抗能力比較強的菌種，將

13、它們保藏在超低溫環(huán)境中可以存活十五年；抵抗能力弱的菌種可以存活五年。而使用人工傳代法保藏時，菌種會出現(xiàn)不同個別基因突變，因此再次驗證了低溫保藏菌種的良好效果。另外保藏菌種的方法還有礦油封藏法和沙土管干燥保藏法等。 </p><p><b>　　4、結(jié)語 </b></p><p>　　利用菌種的生化特性，通過人工制造特定的環(huán)境能夠達到菌種保藏的目的，確保菌種不發(fā)生變異，

14、長時間保存并具備生物活力。常用的保藏材料有：名膠片、牛乳、甘油等，最常用的保藏方法是加入保護劑低溫冷凍保藏法。隨著我國科研技術(shù)的不斷發(fā)展，相信未來會出現(xiàn)更過的實用性強、易于操作的菌種保藏方法，提高菌種保藏的年限和保藏效果，為科研和生產(chǎn)提供更好的保障。 </p><p><b>　　參考文獻： </b></p><p>　　[1]梁寧利.微生物菌種保藏方法概述[J].農(nóng)

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