平菇菌種液氮保藏技術(shù)的優(yōu)化及保藏效果鑒定.pdf

1、食用菌菌種保藏方法眾多，其中液氮保藏是一種安全有效且能長(zhǎng)期保藏菌種的方法。但是液氮保藏過(guò)程中的降溫方式、保護(hù)劑及解凍方式等環(huán)節(jié)都影響到菌種保藏效果。為了更好地保存食用菌種質(zhì)資源，需要系統(tǒng)研究菌種液氮保藏過(guò)程中的各環(huán)節(jié)，并對(duì)保藏后的菌種進(jìn)行保藏效果的鑒定，以期為菌種液氮保藏方法提供一定的理論依據(jù)和技術(shù)支持。
　　 本實(shí)驗(yàn)選擇皖平菇1號(hào)和新平400的原種為實(shí)驗(yàn)材料，設(shè)計(jì)降溫方式、保護(hù)劑及解凍方式三因素三水平的正交試驗(yàn)，對(duì)高溫型和低溫

2、型的兩個(gè)平菇菌種的液氮保藏技術(shù)進(jìn)行比較系統(tǒng)的研究，并鑒定菌種的液氮保藏效果，主要測(cè)定菌絲體生長(zhǎng)指標(biāo)、子實(shí)體形態(tài)學(xué)指標(biāo)及產(chǎn)量、子實(shí)體粗蛋白以及可溶性糖含量、子實(shí)體酯酶同工酶譜和SRAP分子標(biāo)記分析，通過(guò)以上指標(biāo)鑒定其遺傳穩(wěn)定性，以期找到平菇菌種液氮保藏的適宜條件，也為其它菌種的液氮保藏提供一些有利的借鑒。主要結(jié)論如下：
　　 (1)液氮保藏對(duì)皖平菇1號(hào)和新平400菌絲體生長(zhǎng)指標(biāo)影響最小的處理均為不加保護(hù)劑直接將菌種放入液氮，38～

3、40℃水浴快速解凍的條件組合。保護(hù)劑和解凍方式是產(chǎn)生影響的兩個(gè)主要因素，降溫方式為次要因素；
　　 (2)液氮保藏對(duì)皖平菇1號(hào)子實(shí)體形態(tài)學(xué)指標(biāo)、子實(shí)體產(chǎn)量產(chǎn)生影響最小的處理組合均為A1B1C3，保護(hù)劑為主要影響因素；對(duì)新平400以上各指標(biāo)影響最小的處理均為A3B2C3，解凍方式為主要影響因素。
　　 (3)液氮保藏對(duì)皖平菇1號(hào)和新平400子實(shí)體可溶性蛋白和可溶性糖含量的影響不同。對(duì)皖平菇1號(hào)可溶性蛋白影響最小的處理為A1

4、B2C1，保護(hù)劑為主要影響因素，對(duì)可溶性糖影響最小的處理為A1B1C3，解凍方式為主要影響因素；對(duì)新平400子實(shí)體可溶性蛋白影響最小的處理為A3B1C1，降溫方式為主要影響因素，對(duì)可溶性糖影響最小的處理為A2B2C1，保護(hù)劑為主要影響因素。
　　 (4)液氮保藏對(duì)兩個(gè)菌株遺傳穩(wěn)定性沒(méi)有明顯影響，子實(shí)體酯酶同工酶譜產(chǎn)生少量差異，試驗(yàn)所選兩個(gè)處理組合(皖平菇1號(hào)為A1B1C3和A3B3C2，新平400為A2B3C3和A1B1C2)的

5、子實(shí)體DNASRAP擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳分析，部分引物出現(xiàn)少量特異性條帶，這可能是由于真菌本身變異性較大所致，也有可能是因?yàn)樵谝旱２氐倪^(guò)程中，低溫環(huán)境導(dǎo)致了某些抗性基因的變化，這還有待于進(jìn)一步探討。
　　 (5)液氮保藏后皖平菇1號(hào)酯酶同工酶譜平均每個(gè)處理出現(xiàn)2.9條不同的酶帶，新平400平均每個(gè)處理出現(xiàn)4.8條不同酶帶，SRAP分析皖平菇1號(hào)兩個(gè)處理共出現(xiàn)10條差異條帶，新平400共出現(xiàn)23條差異條帶。皖平菇1號(hào)兩個(gè)處理出現(xiàn)的特異